Директива Комиссии 2002/70/EC от 26 июля 2002 г., устанавливающая требования к определению уровней диоксинов и диоксиноподобных ПХБ в кормах (текст имеет отношение к ЕЭЗ)

Директива Комиссии 2002/70/EC

от 26 июля 2002 г.

установление требований к определению содержания диоксинов и диоксиноподобных ПХБ в кормах

(Текст, имеющий отношение к ЕЭЗ)

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 70/373/EEC от 20 июля 1970 г. о введении методов Сообщества отбора проб и анализа для официального контроля кормов(1), с последними поправками, внесенными Актом о присоединении Австрии, Финляндии и Швеции, и, в частности, статью 2 этого документа,

Тогда как:

(1) Директива Совета 1999/29/EC от 22 апреля 1999 г. о нежелательных веществах и продуктах в питании животных(2), с последними поправками, внесенными Директивой 2001/102/EC(3), устанавливает максимальные пределы содержания диоксинов и фуранов в нескольких кормовые материалы и корма.

(2) Необходимо установить требования, которым должен соответствовать метод анализа, чтобы гарантировать, что лаборатории используют методы анализа с сопоставимыми уровнями эффективности.

(3) Положения о отборе проб и методах анализа были разработаны на основе современных знаний и могут быть адаптированы с учетом достижений научных и технологических знаний.

(4) Положения, изложенные в настоящей Директиве, относятся только к анализу диоксинов и диоксиноподобных ПХБ для реализации Директивы 2001/102/EC, вносящей поправки в Директиву 1999/29/EC о нежелательных веществах и продуктах в питании животных.

(5) Необходимо применять активный подход для получения полных надежных данных о присутствии диоксиноподобных ПХД в кормовых материалах и кормах. Поэтому должны быть установлены требования в отношении методов анализа, которые будут использоваться для определения диоксиноподобных ПХБ в кормовых материалах и кормах.

(6) Для отбора проб со значительными уровнями диоксинов можно использовать скрининговый метод анализа с проверенной, широко приемлемой проверкой и высокой производительностью. Уровни диоксинов в этих пробах необходимо определять подтверждающим методом анализа. Поэтому целесообразно установить требования к подтверждающим методам анализа и к методу скрининга.

(7) Меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по пищевой цепи и здоровью животных.

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

Государства-члены должны обеспечить, чтобы отбор проб для официального контроля уровней диоксинов и фуранов и определение уровней диоксиноподобных ПХД в кормах осуществлялся в соответствии с методами, описанными в Приложении I.

Статья 2

Государства-члены должны гарантировать, что подготовка проб и методы анализа, используемые для официального контроля уровней диоксинов и фуранов и определения уровней диоксиноподобных ПХБ в кормах, соответствуют критериям, описанным в Приложении II.

Статья 3

Государства-члены должны ввести в действие законы, нормативные акты и административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, не позднее 28 февраля 2003 г. Они должны немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Когда государства-члены ЕС принимают эти положения, они должны содержать ссылку на настоящую Директиву или сопровождаться такой ссылкой в ​​случае их официальной публикации. Государства-члены ЕС должны определить, как следует делать такую ​​ссылку.

Статья 4

Настоящая Директива вступает в силу на 20-й день после ее публикации в Официальном журнале Европейских сообществ.

Статья 5

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 26 июля 2002 г.

Для Комиссии

Дэвид Бирн

Член Комиссии

(1) OJ L 170, 3 августа 1970 г., с. 2.

(2) OJ L 115, 4 мая 1999 г., с. 32.

(3) ОЖ L 6, 10 января 2002 г., с. 45.

ПРИЛОЖЕНИЕ I

МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ ДЛЯ ОФИЦИАЛЬНОГО КОНТРОЛЯ УРОВНЯ ДИОКСИНОВ (ПХДД/ПХДФ) И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХД В ОПРЕДЕЛЕННЫХ КОРМОВЫХ ПРОДУКТАХ

1. Цель и сфера применения

Пробы, предназначенные для официального контроля уровней содержания диоксинов (ПХДД/ПХДФ), а также для определения содержания диоксинов, подобных ПХД(1) в кормах, должны отбираться в соответствии с положениями Директивы Комиссии 76/371. /ЕЕС от 1 марта 1976 г., устанавливающий в Сообществе методы отбора проб для официального контроля кормов(2). Полученные таким образом совокупные пробы считаются репрезентативными для партий или подпартий, из которых они взяты. Соответствие максимальным уровням, установленным в Директиве 1999/29/ЕС, должно быть установлено на основе уровней, определенных в лабораторных образцах.

2. Соответствие партии или подпартии спецификации.

Контрольная лаборатория должна проанализировать лабораторную пробу на предмет принудительного проведения повторного анализа в случае, если полученный результат первого анализа менее чем на 20 % ниже или выше максимального уровня, и рассчитать среднее значение результатов. Партия принимается, если результат первого анализа более чем на 20 % ниже максимального уровня или если необходим повторный анализ, если среднее значение соответствует соответствующему максимальному уровню, как указано в Директиве 1999/29/EC.

(1) Таблица ВОЗ TEF для оценки риска для человека, основанная на выводах совещания Всемирной организации здравоохранения в Стокгольме, Швеция, 15-18 июня 1997 г. (Van den Berg et al., (1998) Факторы токсической эквивалентности (TEF) для ПХБ, ПХДД, ПХДФ для человека и дикой природы, Перспективы экологического здоровья, 106(12), 775).

>ТАБЛИЦА>

Используемые сокращения: Т = тетра; Пе = пента; Hx = гекса; Hp = гепта; О = окта; CDD = хлордибензо-п-диоксин; CDF = хлордибензофуран; ХБ = хлорбифенил.

(2) OJ L 102, 15 апреля 1976 г., с. 1.

ПРИЛОЖЕНИЕ II

ПОДГОТОВКА ПРОБ И ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ АНАЛИЗА, ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ ОФИЦИАЛЬНОМ КОНТРОЛЕ УРОВНЕЙ ДИОКСИНОВ (ПХДД/ПХДФ) И ОПРЕДЕЛЕНИИ ДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХБ В ОПРЕДЕЛЕННЫХ КОРМОВЫХ ПРОДУКТАХ

1. Цель и область применения.

Эти требования должны применяться при анализе кормовых материалов и кормов для определения диоксинов (полихлорированных дибензо-п-диоксинов (ПХДД) и полихлорированных дибензофуранов (ПХДФ)) и диоксиноподобных полихлорированных дифенилов (ПХБ).

Мониторинг присутствия диоксинов в кормах может осуществляться с помощью стратегии, включающей метод скрининга, чтобы отобрать те образцы, в которых уровни диоксинов и диоксиноподобных ПХБ ниже или превышают интересующий уровень менее чем на 30–40 %. Концентрацию диоксинов в пробах со значительными уровнями необходимо определить/подтвердить подтверждающим методом.

Методы скрининга — это методы, которые используются для обнаружения присутствия диоксинов и диоксиноподобных ПХБ на интересующем уровне. Эти методы обеспечивают высокую пропускную способность образцов и используются для просеивания большого количества образцов на наличие потенциальных положительных результатов. Они специально разработаны, чтобы избежать ложноотрицательных результатов.

Подтверждающие методы – это методы, которые предоставляют полную или дополнительную информацию, позволяющую идентифицировать и однозначно количественно определить диоксины и диоксиноподобные ПХБ на интересующем уровне.

2. Предыстория

Поскольку экологические и биологические образцы (включая образцы кормовых материалов/кормов), как правило, содержат сложные смеси различных соединений диоксинов, для облегчения оценки риска была разработана концепция коэффициентов токсической эквивалентности (TEF). Было установлено, что эти TEF выражают концентрации смесей 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ, а в последнее время и некоторых неорто- и моно-ортозамещенных ПХД, которые обладают диоксиноподобной активностью в токсичных эквивалентах (TEQs). ) 2,3,7,8-ТХДД (см. Приложение I, сноска 1).

Концентрации отдельных веществ в данном образце умножаются на соответствующий TEF и затем суммируются, чтобы получить общую концентрацию диоксиноподобных соединений, выраженную в TEQ.

Концепция «верхнего предела» требует использования предела количественного определения вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

Концепция «нижней границы» требует использования нуля для вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

Концепция «среднего предела» требует использования половины предела количественного определения для расчета вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

3. Требования к обеспечению качества, которые необходимо соблюдать при подготовке проб.

Общие положения по подготовке проб для анализа, изложенные в Приложении к Директиве Комиссии 81/680/EEC от 30 июля 1981 г., вносящей поправки в Директивы 71/250/EEC, 71/393/EEC, 72/199/EEC, 73/ Применимы 46/EEC, 74/203/EEC, 75/84/EEC, 76/372/EEC и 78/633/EEC, устанавливающие методы анализа Сообщества для официального контроля кормов(1).

Кроме того, необходимо соблюдать следующие требования:

- образцы необходимо хранить и транспортировать в стеклянной, алюминиевой, полипропиленовой или полиэтиленовой таре. Следы бумажной пыли необходимо удалить из контейнера для проб. Стеклянную посуду следует промыть растворителями, предварительно проверенными на наличие диоксинов,

- выполнить холостой анализ, выполнив всю аналитическую процедуру, исключив только образец,

- вес образца, используемого для экстракции, должен быть достаточным для выполнения требований в отношении чувствительности.

4. Требования к лабораториям

- Лаборатории должны продемонстрировать эффективность метода в диапазоне уровня интереса, например, 0,5 ×, 1 × и 2 × уровня интереса с приемлемым коэффициентом вариации для повторного анализа. Подробную информацию о критериях приемки см. в пункте 5.

- Предел количественного определения для подтверждающего метода должен находиться в диапазоне примерно одной пятой уровня интереса, чтобы гарантировать, что приемлемые коэффициенты вариаций соблюдаются в диапазоне уровня интереса.

- Регулярные холостой контроль и эксперименты с добавлением или анализ контрольных образцов (предпочтительно, если таковой имеется, сертифицированный эталонный материал) должны проводиться в качестве внутренних мер контроля качества.

- Успешное участие в межлабораторных исследованиях по оценке квалификации лабораторий является лучшим способом доказать компетентность в проведении конкретных анализов. Однако успешное участие в межлабораторных исследованиях, например, проб почвы или сточных вод не обязательно доказывает компетентность также в области проб продуктов питания или кормов, которые имеют более низкие уровни загрязнения. Поэтому постоянное участие в межлабораторных исследованиях по определению диоксинов и диоксиноподобных ПХБ в соответствующих матрицах кормов/продуктов питания является обязательным.

- Лаборатории должны быть аккредитованы признанным органом, действующим в соответствии с Руководством ISO 58, чтобы гарантировать, что они применяют аналитическое обеспечение качества. Лаборатории должны быть аккредитованы в соответствии со стандартом ISO/IEC/17025:1999.

5. Требования к методикам анализа диоксинов и диоксиноподобных ПХБ.

Основные требования к приемке аналитических методик:

- Высокая чувствительность и низкие пределы обнаружения. Для ПХДД и ПХДФ обнаруживаемые количества должны находиться в диапазоне пикограмм ТЭ (10–12 г) из-за чрезвычайной токсичности некоторых из этих соединений. Известно, что ПХД встречаются в более высоких концентрациях, чем ПХДД и ПХДФ. Для большинства родственных ПХД чувствительность в диапазоне нанограмм (10-9 г) уже достаточна. Однако для измерения более токсичных диоксиноподобных конгенеров ПХБ (в частности, неортозамещенных конгенеров) необходимо достичь той же чувствительности, что и для ПХДД и ПХДФ.

- Высокая избирательность (специфичность). Необходимо отличать ПХДД, ПХДФ и диоксиноподобные ПХБ от множества других, совместно экстрагируемых и, возможно, мешающих соединений, присутствующих в концентрациях, на несколько порядков превышающих концентрации интересующих аналитов. Для методов газовой хроматографии/масс-спектрометрии (ГХ/МС) необходимо различать различные конгенеры, например, токсичные (например, семнадцать 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ и диоксиноподобные ПХД) и другие конгенеры. . Биоанализы должны иметь возможность избирательно определять значения TEQ как сумму ПХДД, ПХДФ и диоксиноподобных ПХД.

- Высокая точность (верность и точность). Определение должно обеспечивать достоверную и надежную оценку истинной концентрации в образце. Высокая точность (точность измерения: степень соответствия результата измерения истинному или приписанному значению измерения) необходима во избежание отклонения результата анализа пробы на основании низкой достоверности оценки TEQ. . Точность выражается как достоверность (разница между средним значением, измеренным для аналита в сертифицированном материале, и его сертифицированным значением, выраженным в процентах от этого значения) и прецизионностью (прецизионность обычно рассчитывается как стандартное отклонение, включая повторяемость и воспроизводимость, и указывает на точность). близость согласия результатов, полученных при многократном применении экспериментальной процедуры в заданных условиях).

Методы скрининга могут включать биоанализы и методы ГХ/МС; Подтверждающими методами являются методы газовой хроматографии/масс-спектрометрии высокого разрешения (HRGC/HRMS). При определении общего значения TEQ должны соблюдаться следующие критерии:

>ТАБЛИЦА>

6. Особые требования к методам ГХ/МС, которые должны соблюдаться в целях скрининга или подтверждения.

- Добавление меченных 13C 2,3,7,8-хлорзамещенных внутренних стандартов ПХДД/Ф (а также внутренних стандартов диоксиноподобных ПХД, меченных 13C, если необходимо определить диоксиноподобные ПХБ) должно осуществляться на в самом начале или начале аналитического метода, например, перед экстракцией с целью валидации аналитической процедуры. Должен быть добавлен как минимум один конгенер для каждой из тетра- и октахлорированных гомологичных групп для ПХДД/Ф (и как минимум один конгенер для каждой из гомологичных групп для диоксиноподобных ПХД, если необходимо определить диоксиноподобные ПХБ) (альтернативно, по крайней мере, один конгенер для каждой выбранной масс-спектрометрической функции регистрации ионов, используемой для мониторинга ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХД). Очевидно, что в случае подтверждающих методов предпочтение отдается использованию всех 17 меченных 13C 2,3,7,8-замещенных внутренних стандартов ПХДД/Ф и всех 12 внутренних стандартов диоксиноподобных ПХБ, меченных 13C (если диоксин- типа печатные платы надо определять).

Относительные коэффициенты отклика также следует определять для тех конгенеров, к которым не добавляется меченный 13C аналог, используя соответствующие калибровочные растворы.

- Для кормов растительного происхождения и кормов животного происхождения с содержанием жира менее 10 % добавление внутренних стандартов перед экстракцией является обязательным. Для кормов животного происхождения, содержащих более 10 % жира, внутренние стандарты можно добавлять либо перед экстракцией, либо после экстракции жира. Должна быть проведена соответствующая проверка эффективности экстракции в зависимости от стадии внедрения внутренних стандартов и от того, сообщаются ли результаты на основе продукта или жира.

- Перед анализом ГХ/МС необходимо добавить один или два восстановительных (суррогатных) стандарта(а).

- Необходим контроль восстановления. Для подтверждающих методов восстановление отдельных внутренних стандартов должно находиться в диапазоне от 60 % до 120 %. Более низкие или более высокие степени извлечения отдельных конгенеров, в частности некоторых гепта- и октахлорированных дибензодиоксинов и дибензофуранов, приемлемы при условии, что их вклад в значение ТЭ не превышает 10 % от общего значения ТЭ (в пересчете на ПХДД/Ф). только). Для методов скрининга степень извлечения должна находиться в диапазоне от 30 % до 140 %.

- Отделение диоксинов от мешающих хлорированных соединений, таких как ПХД и хлорированные дифениловые эфиры, следует проводить с помощью подходящих хроматографических методов (предпочтительно с использованием колонок с флорисилом, оксидом алюминия и/или углерода).

- Газохроматографическое разделение изомеров должно быть достаточным (<25 % от пика к пику между 1,2,3,4,7,8-HxCDF и 1,2,3,6,7,8-HxCDF).

- Определение следует проводить в соответствии с методом 1613 Агентства по охране окружающей среды, версия B: тетра- и октахлорированные диоксины и фураны методом изотопного разбавления HRGC/HRMS или другим способом с эквивалентными критериями эффективности.

- Разница между верхним и нижним уровнями не должна превышать 20 % для кормов с загрязнением диоксинами в диапазоне или выше максимального уровня. Для кормов с уровнем загрязнения значительно ниже максимального уровня разница может составлять от 25% до 40%.

7. Скрининговые методы анализа

7.1. Введение

С использованием метода скрининга можно использовать различные аналитические подходы: метод чистого скрининга и количественный подход.

Подход к скринингу

Реакция образцов сравнивается с реакцией эталонного образца на интересующем уровне. Образцы с ответом ниже эталонного объявляются отрицательными, образцы с более высоким ответом считаются положительными. Требования:

- в каждую серию испытаний должны быть включены холостой образец и эталонный образец(ы), которые извлекаются и тестируются одновременно в идентичных условиях. Эталонный образец должен демонстрировать явно повышенную реакцию по сравнению с контрольным образцом.

- дополнительные эталонные образцы при 0,5 × и 2 × уровне интереса должны быть включены для демонстрации надлежащего выполнения теста в интересующем диапазоне для контроля уровня интереса,

- при тестировании других матриц должна быть продемонстрирована пригодность эталонного образца(ов), предпочтительно путем включения образцов, которые, по данным HRGC/HRMS, содержат уровень TEQ, близкий к уровню эталонного образца, или же холостого образца с добавлением этого уровня,

- поскольку в биоанализах нельзя использовать внутренние стандарты, тесты на повторяемость очень важны для получения информации о стандартном отклонении в пределах одной серии тестов. Коэффициент вариации должен быть ниже 30 %,

- для биоанализов должны быть определены целевые соединения, возможные помехи и максимально допустимые уровни холостого контроля.

Количественный подход

Количественный подход требует стандартных серий разведений, двойной или тройной очистки и измерения, а также холостого контроля и контроля извлечения. Результат может быть выражен как TEQ, при этом предполагается, что соединения, ответственные за сигнал, соответствуют принципу TEQ. Это можно сделать с помощью ТХДД (или стандартной смеси диоксина и фурана) для получения калибровочной кривой для расчета уровня ТЭ в экстракте и, следовательно, в образце. Впоследствии это корректируется на уровень TEQ, рассчитанный для холостой пробы (для учета примесей от используемых растворителей и химикатов), и на извлечение (рассчитанное на основе уровня TEQ в образце контроля качества вблизи интересующего предела). Важно отметить, что часть видимых потерь при восстановлении может быть обусловлена ​​матричными эффектами и/или различиями между значениями TEF в биоанализах и официальными значениями TEF, установленными ВОЗ.

7.2. Требования к методам анализа, используемым для скрининга

- Для скрининга могут использоваться методы анализа ГХ/МС и биоанализы. Для методов ГХ/МС должны использоваться требования, изложенные в пункте 6. Особые требования для клеточных биоанализов изложены в пункте 7.3, а для биоанализов на основе наборов – в пункте 7.4.

- Необходима информация о количестве ложноположительных и ложноотрицательных результатов большого набора образцов ниже и выше максимального уровня или уровня действия по сравнению с содержанием TEQ, определенным подтверждающим методом анализа. Фактический уровень ложноотрицательных результатов должен быть ниже 1%. Частота ложноположительных результатов должна быть достаточно низкой, чтобы использование инструмента скрининга было выгодным.

- Положительные результаты всегда должны быть подтверждены подтверждающим методом анализа (HRGC/HRMS). Кроме того, образцы из широкого диапазона TEQ должны быть подтверждены методом HRGC/HRMS (примерно от 2% до 10% отрицательных образцов). Информация о соответствии между результатами биоанализа и результатами HRGC/HRMS должна быть доступна.

7.3. Особые требования к клеточным биоанализам

- При проведении биологического анализа каждый тест требует серии эталонных концентраций ТХДД или смеси диоксина/фурана (полная кривая зависимости доза-эффект с R2 > 0,95). Однако в целях скрининга можно использовать расширенную кривую низкого уровня для анализа образцов низкого уровня.

- Для получения результатов биоанализа за постоянный период времени следует использовать эталонную концентрацию ТХДД (примерно в три раза превышающую предел количественного определения) в листе контроля качества. Альтернативой может быть относительная реакция эталонного образца по сравнению с калибровочной линией TCDD, поскольку реакция клеток может зависеть от многих факторов.

- Таблицы контроля качества (КК) для каждого типа эталонного материала должны быть записаны и проверены, чтобы убедиться, что результат соответствует установленным рекомендациям.

- В частности, для количественных расчетов индукция используемого разведения образца должна находиться в пределах линейной части кривой отклика. Образцы, находящиеся выше линейной части кривой отклика, должны быть разбавлены и протестированы повторно. Поэтому рекомендуется тестировать не менее трех или более разведений одновременно.

- Процентное стандартное отклонение не должно превышать 15 % при трехкратном определении для каждого разведения образца и не превышать 30 % между тремя независимыми экспериментами.

- Предел обнаружения может быть установлен как трехкратное стандартное отклонение холостого раствора растворителя или фонового отклика. Другой подход заключается в применении отклика, превышающего фоновый (коэффициент индукции в пять раз превышает холостой раствор растворителя), рассчитанный на основе калибровочной кривой дня. Предел количественного определения может быть установлен как пяти-шестикратное стандартное отклонение холостого раствора растворителя или фонового отклика, или применять отклик, который явно превышает фон (коэффициент индукции в 10 раз превышает холостой раствор растворителя), рассчитанный по калибровочной кривой день.

7.4. Особые требования к биоанализам на основе наборов(2)

- Необходимо следовать инструкциям производителя по подготовке проб и проведению анализов.

- Тест-наборы не следует использовать после истечения срока годности.

- Не следует использовать материалы или компоненты, предназначенные для использования с другими комплектами.

- Тестовые наборы следует хранить в указанном диапазоне температур хранения и использовать при указанной рабочей температуре.

- Предел обнаружения для иммуноанализа определяется как сумма среднего значения и трехкратного стандартного отклонения на основе 10-кратного повторного анализа бланка, разделенная на значение наклона уравнения линейной регрессии.

- Эталонные стандарты следует использовать для испытаний в лаборатории, чтобы убедиться, что чувствительность к стандарту находится в допустимых пределах.

8. Отчетность о результатах

Насколько позволяет используемая аналитическая процедура, результаты анализа должны содержать уровни отдельных конгенеров ПХДД/Ф и ПХБ и сообщаться как нижний, верхний и средний пределы, чтобы включить максимум информации в отчет о результатах и тем самым позволяя интерпретировать результаты в соответствии с конкретными требованиями.

В отчете также следует указать содержание липидов в образце, а также метод, использованный для экстракции липидов.

Восстановление отдельных внутренних стандартов должно быть доступно в случае, если восстановление выходит за пределы диапазона, указанного в пункте 6, в случае превышения максимального уровня и в других случаях по запросу.

(1) OJ L 246, 29 августа 1981 г., с. 32.

(2) До сих пор не было представлено никаких доказательств того, что коммерчески доступные биоанализы на основе наборов, обладающие достаточной чувствительностью и надежностью, чтобы их можно было использовать для проверки наличия диоксинов в необходимых уровнях в образцах пищевых продуктов и кормов.