Директива Комиссии 2002/69/EC от 26 июля 2002 г., устанавливающая методы отбора проб и методы анализа для официального контроля диоксинов и определения диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах (текст имеет отношение к ЕЭЗ)

Директива Комиссии 2002/69/EC

от 26 июля 2002 г.

определение методов отбора проб и методов анализа для официального контроля диоксинов и определения диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах

(Текст, имеющий отношение к ЕЭЗ)

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 85/591/EEC от 20 декабря 1985 г. о введении методов Сообщества отбора проб и анализа для мониторинга пищевых продуктов, предназначенных для потребления человеком(1), и в частности ее Статью 1,

Тогда как:

(1) Регламент Комиссии (ЕС) № 466/2001(2) с последними поправками, внесенными Регламентом (ЕС) № 563/2002(3) и с поправками, внесенными Регламентом Совета (ЕС) № 2375/2001(4), устанавливает максимальные пределы. на диоксины и фураны в некоторых пищевых продуктах.

(2) Директива Совета 89/397/EEC от 14 июня 1989 г. об официальном контроле пищевых продуктов(5) устанавливает общие принципы осуществления контроля пищевых продуктов. Директива Совета 93/99/EEC от 29 октября 1993 г. о дополнительных мерах, касающихся официального контроля пищевых продуктов(6) вводит систему стандартов качества для лабораторий, которым государства-члены доверяют официальный контроль пищевых продуктов.

(3) Директива 85/591/EEC установила общие критерии методов отбора проб и анализа. Однако в некоторых случаях необходимо установить более конкретные критерии и/или требования, которым должен соответствовать метод анализа, чтобы гарантировать, что лаборатории используют методы анализа с сопоставимыми уровнями эффективности.

(4) Положения о отборе проб и методах анализа были разработаны на основе современных знаний и могут быть адаптированы с учетом достижений научных и технологических знаний.

(5) Положения, изложенные в настоящей Директиве, относятся только к отбору проб и анализу диоксинов и диоксиноподобных ПХБ для реализации Регламента (ЕС) № 466/2001 и не влияют на стратегию отбора проб, уровни и частоту отбора проб, как указано. в Приложениях III и IV к Директиве Совета 96/23/EC от 29 апреля 1996 г. о мерах по мониторингу определенных веществ и их остатков в живых животных и продуктах животного происхождения и об отмене Директив 85/358/EEC и 86/469/EEC и Решений 89/ 187/ЕЕС и 91/664/ЕЕС(7). Они не влияют на критерии отбора проб, изложенные в Решении Комиссии 98/179/EC от 23 февраля 1998 г., устанавливающем подробные правила официального отбора проб для мониторинга определенных веществ и их остатков в живых животных и продуктах животного происхождения(8).

(6) Необходимо применять активный подход для получения полных надежных данных о присутствии диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах. Поэтому должны быть установлены требования к методам анализа, которые будут использоваться для определения диоксиноподобных ПХД в пищевых продуктах.

(7) Для отбора проб со значительными уровнями диоксинов можно использовать скрининговый метод анализа с проверенной, широко приемлемой проверкой и высокой производительностью. Уровни диоксинов в этих пробах необходимо определять подтверждающим методом анализа. Поэтому целесообразно установить строгие требования к подтверждающим методам анализа и минимальные требования к скрининговому методу.

(8) Меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по пищевой цепи и здоровью животных.

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

Государства-члены должны обеспечить, чтобы отбор проб для официального контроля уровней диоксинов и фуранов и определение уровней диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах проводился в соответствии с методами, описанными в Приложении I.

Статья 2

Государства-члены должны гарантировать, что подготовка проб и методы анализа, используемые для официального контроля уровней диоксинов и фуранов и определения уровней диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах, соответствуют критериям, описанным в Приложении II.

Статья 3

Государства-члены должны ввести в действие законы, нормативные акты и административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, не позднее 28 февраля 2003 г. Они должны немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Когда государства-члены ЕС принимают эти положения, они должны содержать ссылку на настоящую Директиву или сопровождаться такой ссылкой в ​​случае их официальной публикации. Государства-члены ЕС должны определить, как следует делать такую ​​ссылку.

Статья 4

Настоящая Директива вступает в силу на 20-й день после ее публикации в Официальном журнале Европейских сообществ.

Статья 5

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 26 июля 2002 г.

Для Комиссии

Дэвид Бирн

Член Комиссии

(1) OJ L 372, 31.12.1985, с. 50.

(2) OJ L 77, 16 марта 2001 г., с. 1.

(3) OJ L 86, 3 апреля 2002 г., с. 5.

(4) OJ L 321, 6 декабря 2001 г., с. 1.

(5) OJ L 186, 30 июня 1989 г., с. 23.

(6) OJ L 290, 24.11.1993, с. 14.

(7) OJ L 125, 23 мая 1996 г., с. 10.

(8) OJ L 65, 5 марта 1998 г., с. 31.

ПРИЛОЖЕНИЕ I

МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ ДЛЯ ОФИЦИАЛЬНОГО КОНТРОЛЯ УРОВНЯ ДИОКСИНОВ (ПХДД/ПХДФ) И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХБ В НЕКОТОРЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

1. Цель и сфера применения

Пробы, предназначенные для официального контроля уровня содержания диоксинов (ПХДД/ПХДФ), а также для определения содержания диоксиноподобных ПХБ(1) в пищевых продуктах, отбираются по методикам, описанным ниже. Полученные таким образом совокупные пробы следует считать репрезентативными для партий или подпартий, из которых они взяты. Соответствие максимальным уровням, установленным Регламентом Комиссии (ЕС) № 466/2001, устанавливающим максимальные уровни определенных загрязнителей в пищевых продуктах, должно быть установлено на основе уровней, определенных в лабораторных образцах.

2. Определения

Партия: идентифицируемое количество продуктов питания, доставленное одновременно и имеющее, как установлено должностным лицом, общие характеристики, такие как происхождение, сорт, тип упаковки, упаковщик, грузоотправитель или маркировка. В случае рыбы и рыбной продукции размер рыбы также должен быть сопоставимым.

Подпартия: выделенная часть большой партии для применения метода отбора проб к этой назначенной части. Каждый подпартий должен быть физически отделен и идентифицируем.

Дополнительная проба: количество материала, взятое из одного места партии или части партии.

Совокупная проба: совокупная сумма всех дополнительных проб, взятых из партии или части партии.

Лабораторная проба: репрезентативная часть/количество совокупной пробы, предназначенной для лаборатории.

3. Общие положения

3.1. Персонал

Отбор проб должен осуществляться уполномоченным квалифицированным лицом, как указано государствами-членами.

3.2. Материал, подлежащий отбору проб

От каждой партии, подлежащей проверке, необходимо отбирать пробы отдельно.

3.3. Меры предосторожности, которые необходимо принять

При отборе и подготовке лабораторных проб необходимо соблюдать меры предосторожности, чтобы избежать изменений, которые могли бы повлиять на содержание диоксинов и диоксиноподобных ПХБ, отрицательно повлиять на аналитическое определение или сделать совокупные пробы нерепрезентативными.

3.4. Дополнительные выборки

Насколько это практически возможно, дополнительные пробы должны быть отобраны в различных местах, распределенных по всей партии или подпартии. Отступление от этой процедуры должно быть зафиксировано в протоколе, предусмотренном п. 3.8.

3.5. Подготовка совокупного образца

Совокупная выборка формируется путем объединения всех дополнительных выборок. Он должен составлять не менее 1 кг, за исключением случаев, когда это практически невозможно, например. когда была отобрана проба из одной упаковки.

3.6. Разделение совокупной пробы на лабораторные пробы для целей правоприменения, защиты и судейства

Лабораторные пробы для целей правоприменения, торговли (обороны) и судейства должны быть взяты из гомогенизированной совокупной пробы, если это не противоречит правилам государств-членов относительно отбора проб. Размер лабораторных проб для принудительного исполнения должен быть достаточным, чтобы обеспечить возможность, по крайней мере, проведения дублирующих анализов.

3.7. Упаковка и транспортировка совокупных и лабораторных проб

Каждый агрегат и лабораторная проба должны быть помещены в чистый инертный контейнер, обеспечивающий адекватную защиту от загрязнения, от потери аналитов в результате адсорбции на внутренней стенке контейнера и от повреждений при транспортировке. Должны быть приняты все необходимые меры предосторожности во избежание изменения состава заполнителя и лабораторных проб, которое может возникнуть при транспортировке или хранении.

3.8. Запечатывание и маркировка агрегатов и лабораторных проб

Каждая проба, взятая для служебного использования, должна быть опечатана на месте отбора и идентифицирована в соответствии с правилами государств-членов. О каждом отборе пробы должна вестись запись, позволяющая однозначно идентифицировать каждую партию, с указанием даты и места отбора проб, а также любой дополнительной информации, которая может оказаться полезной для аналитика.

4. Планы отбора проб

Применяемый метод отбора проб должен гарантировать, что совокупная выборка является репрезентативной для партии, подлежащей контролю.

Количество дополнительных выборок

В случае молока и масел, для которых можно предположить однородное распределение рассматриваемых загрязнителей в пределах данной партии, достаточно отобрать три дополнительных пробы на партию, которые образуют совокупную пробу. Должна быть указана ссылка на номер партии. Для других продуктов минимальное количество дополнительных проб, отбираемых из партии, должно соответствовать таблице 1.

Суммарная проба, объединяющая все инкрементальные пробы, должна составлять не менее 1 кг (см. пункт 3.5). Инкрементальные образцы должны иметь одинаковый вес. Масса инкрементной пробы должна быть не менее 100 грамм. Вес дополнительной выборки зависит от размера частиц в партии. Отступление от этой процедуры должно быть зафиксировано в протоколе, предусмотренном п. 3.8. В соответствии с положениями Решения Комиссии 97/747/EC от 27 октября 1997 г., устанавливающего уровни и частоту отбора проб, предусмотренные Директивой Совета 96/23/EC для мониторинга определенных веществ и их остатков в определенных продуктах животного происхождения(2) объем выборки куриных яиц составляет не менее 12 яиц (как для оптовых партий, так и для партий, состоящих из индивидуальных упаковок, табл. 1 и 2).

ТАБЛИЦА 1

Минимальное количество дополнительных проб, отбираемых из партии

>ТАБЛИЦА>

Если партия состоит из отдельных упаковок, то количество упаковок, которое необходимо принять для формирования совокупной выборки, указано в таблице 2.

ТАБЛИЦА 2

Количество упаковок (дополнительные пробы), которое должно быть отобрано для формирования совокупной пробы, если партия состоит из отдельных упаковок

>ТАБЛИЦА>

5. Соответствие партии или подпартии спецификации.

Контрольная лаборатория должна проанализировать лабораторную пробу на предмет принудительного проведения повторного анализа в случае, если полученный результат первого анализа менее чем на 20 % ниже или выше максимального уровня, и рассчитать среднее значение результатов. Партия принимается, если результат первого анализа более чем на 20 % ниже максимального уровня или, если необходим повторный анализ, если среднее значение соответствует соответствующему максимальному уровню, как указано в Регламенте (ЕС) № 466/2001.

(1) Таблица ВОЗ TEF для оценки риска для человека, основанная на выводах совещания Всемирной организации здравоохранения в Стокгольме, Швеция, 15-18 июня 1997 г. (Van den Berg et al., (1998) Факторы токсической эквивалентности (TEF) для ПХБ, ПХДД, ПХДФ для человека и дикой природы, Перспективы экологического здоровья, 106(12), 775).

>ТАБЛИЦА>

Используемые сокращения: Т = тетра; Пе = пента; Hx = гекса; Hp = гепта; О = окта; CDD = хлордибензодиоксин; CDF = хлордибензофуран; ХБ = хлорбифенил.

(2) OJ L 303, 6 ноября 1997 г., с. 12.

ПРИЛОЖЕНИЕ II

ПОДГОТОВКА ПРОБ И ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ АНАЛИЗА, ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ ОФИЦИАЛЬНОМ КОНТРОЛЕ УРОВНЕЙ ДИОКСИНОВ (ПХДД/ПХДФ) И ОПРЕДЕЛЕНИИ ДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХБ В НЕКОТОРЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

1. Цель и область применения.

Эти требования должны применяться при анализе пищевых продуктов для официального контроля уровней диоксинов (полихлорированных дибензо-п-диоксинов (ПХДД) и полихлорированных дибензофуранов (ПХДФ)) и определения диоксиноподобных ПХБ.

Мониторинг присутствия диоксинов в пищевых продуктах может осуществляться с помощью стратегии, включающей метод скрининга, чтобы отобрать те образцы, в которых уровни диоксинов и диоксиноподобных ПХБ менее чем на 30-40% ниже или превышают интересующий уровень. Концентрацию диоксинов в пробах со значительными уровнями необходимо определить/подтвердить подтверждающим методом.

Методы скрининга — это методы, которые используются для обнаружения присутствия диоксинов и диоксиноподобных ПХБ на интересующем уровне. Эти методы обеспечивают высокую пропускную способность образцов и используются для просеивания большого количества образцов на наличие потенциальных положительных результатов. Они специально разработаны, чтобы избежать ложноотрицательных результатов.

Подтверждающие методы – это методы, которые предоставляют полную или дополнительную информацию, позволяющую идентифицировать и однозначно количественно определить диоксины и диоксиноподобные ПХБ на интересующем уровне.

2. Предыстория

Поскольку образцы окружающей среды и биологические образцы (включая образцы пищевых продуктов) обычно содержат сложные смеси различных соединений диоксинов, для облегчения оценки риска была разработана концепция коэффициентов токсической эквивалентности (TEF). Было установлено, что эти TEF выражают концентрации смесей 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ, а в последнее время и некоторых неорто- и моно-орто-замещенных ПХБ, которые обладают диоксиноподобной активностью в токсичных эквивалентах (TEQs). ) 2,3,7,8-ТХДД (см. Приложение I, сноска 1).

Концентрации отдельных веществ в данном образце умножаются на соответствующий TEF и затем суммируются, чтобы получить общую концентрацию диоксиноподобных соединений, выраженную в виде TEQ.

Концепция «верхнего предела» требует использования предела количественного определения вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

Концепция «нижней границы» требует использования нуля для вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

Концепция «среднего предела» требует использования половины предела количественного определения для расчета вклада каждого неопределенного конгенера в TEQ.

3. Требования к обеспечению качества, которые необходимо соблюдать при подготовке проб.

- Должны быть приняты меры во избежание перекрестного загрязнения на каждом этапе процедуры отбора проб и анализа.

- Образцы следует хранить и транспортировать в стеклянных, алюминиевых, полипропиленовых или полиэтиленовых контейнерах. Следы бумажной пыли необходимо удалить из контейнера для проб. Стеклянную посуду следует промыть растворителями, предварительно проверенными на наличие диоксинов.

- Хранение и транспортировка проб должны осуществляться таким образом, чтобы обеспечить целостность проб пищевых продуктов.

- Насколько это возможно, тонко измельчить и тщательно перемешать каждый лабораторный образец, используя процесс, который, как было продемонстрировано, обеспечивает полную гомогенизацию (например, измельчение до пропуска через сито 1 мм); образцы необходимо высушить перед измельчением, если содержание влаги слишком велико.

- Выполните холостой анализ, выполнив всю аналитическую процедуру, исключив только образец.

- Вес образца, используемого для экстракции, должен быть достаточным для выполнения требований в отношении чувствительности.

- Существует множество удовлетворительных конкретных процедур подготовки проб, которые можно использовать для рассматриваемых продуктов. Процедуры должны быть проверены в соответствии с международно признанными руководящими принципами.

4. Требования к лабораториям

- Лаборатории должны продемонстрировать эффективность метода в диапазоне уровня интереса, например 0,5×, 1× и 2× уровень интереса с приемлемым коэффициентом вариации для повторного анализа. Подробную информацию о критериях приемки см. в пункте 5.

- Предел количественного определения для подтверждающего метода должен находиться в пределах примерно одной пятой уровня интереса, чтобы гарантировать, что приемлемые коэффициенты вариаций соблюдаются в диапазоне уровня интереса.

- В качестве внутренних мер контроля качества следует проводить регулярные холостой контроль и эксперименты с добавлением добавок или анализ контрольных образцов (предпочтительно, если таковой имеется, сертифицированный эталонный материал).

- Успешное участие в межлабораторных исследованиях по оценке квалификации лабораторий является лучшим способом доказать компетентность в проведении конкретных анализов. Однако успешное участие в межлабораторных исследованиях, напр. пробы почвы или сточных вод не обязательно доказывают компетентность также в области проб пищевых продуктов или кормов, которые имеют более низкие уровни загрязнения. Поэтому постоянное участие в межлабораторных исследованиях по определению диоксинов и диоксиноподобных ПХБ в соответствующих матрицах кормов/продуктов питания является обязательным.

- В соответствии с положениями Директивы 93/99/EEC, лаборатории должны быть аккредитованы признанным органом, действующим в соответствии с Руководством ISO 58, чтобы гарантировать, что они применяют аналитическое обеспечение качества. Лаборатории должны быть аккредитованы в соответствии со стандартом ISO/IEC/17025:1999.

5. Требования, которым должна соответствовать аналитическая методика для диоксинов и диоксиноподобных ПХД

Основные требования к приемке аналитических методик:

- Высокая чувствительность и низкие пределы обнаружения. Для ПХДД и ПХДФ обнаруживаемые количества должны находиться в диапазоне пикограмм ТЭ (10–12 г) из-за чрезвычайной токсичности некоторых из этих соединений. Известно, что ПХД встречаются в более высоких концентрациях, чем ПХДД и ПХДФ. Для большинства конгенеров ПХБ чувствительность в диапазоне нанограмм (10-9 г) уже достаточна. Однако для измерения более токсичных диоксиноподобных конгенеров ПХБ (в частности, неортозамещенных конгенеров) необходимо достичь той же чувствительности, что и для ПХДД и ПХДФ.

- Высокая избирательность (специфичность). Необходимо отличать ПХДД, ПХДФ и диоксиноподобные ПХБ от множества других, совместно экстрагируемых и, возможно, мешающих соединений, присутствующих в концентрациях, на несколько порядков превышающих концентрации интересующих аналитов. Для методов газовой хроматографии/масс-спектрометрии (ГХ/МС) необходима дифференциация между различными родственными соединениями, например, между токсичными (например, семнадцатью 2,3,7,8-замещенными ПХДД и ПХДФ и диоксиноподобными ПХД) и другими родственными соединениями. Биоанализы должны иметь возможность избирательно определять значения TEQ как сумму ПХДД, ПХДФ и диоксиноподобных ПХД.

- Высокая точность (верность и точность). Определение должно обеспечивать достоверную оценку истинной концентрации в образце. Высокая точность (точность измерения: близость соответствия результата измерения истинному или приписанному значению измерения) необходима во избежание отклонения результата анализа пробы на основании низкой достоверности оценки ТЭК. Точность выражается как достоверность (разница между средним значением, измеренным для аналита в сертифицированном материале, и его сертифицированным значением, выраженным в процентах от этого значения) и прецизионностью (прецизионность обычно рассчитывается как стандартное отклонение, включая повторяемость и воспроизводимость, и указывает на точность). близость согласия результатов, полученных при многократном применении экспериментальной процедуры в заданных условиях).

Методы скрининга могут включать биоанализы и методы ГХ/МС; Подтверждающими методами являются методы газовой хроматографии/масс-спектрометрии высокого разрешения (HRGC/HRMS). При определении общего значения TEQ должны соблюдаться следующие критерии:

>ТАБЛИЦА>

6. Особые требования к методам ГХ/МС, которые должны соблюдаться в целях скрининга или подтверждения.

- Добавление меченных 13C 2,3,7,8-хлорзамещенных внутренних стандартов ПХДД/Ф (а также внутренних стандартов диоксиноподобных ПХД, меченных 13C, если необходимо определить диоксиноподобные ПХБ) должно осуществляться на самое начало или начало аналитического метода, например перед экстракцией для валидации аналитической процедуры. Должен быть добавлен как минимум один конгенер для каждой из тетра- и октахлорированных гомологичных групп для ПХДД/Ф (и как минимум один конгенер для каждой из гомологичных групп для диоксиноподобных ПХД, если необходимо определить диоксиноподобные ПХБ) (альтернативно, по крайней мере, один конгенер для каждой выбранной масс-спектрометрической функции регистрации ионов, используемой для мониторинга ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХД). Очевидно, что в случае подтверждающих методов предпочтение отдается использованию всех 17 меченных 13C 2,3,7,8-замещенных внутренних стандартов ПХДД/Ф и всех 12 внутренних стандартов диоксиноподобных ПХБ, меченных 13C (если диоксин- типа печатные платы надо определять).

Относительные коэффициенты отклика также следует определять для тех конгенеров, к которым не добавляется меченный 13C аналог, используя соответствующие калибровочные растворы.

- Для пищевых продуктов растительного и животного происхождения с содержанием жира менее 10 % добавление внутренних стандартов перед экстракцией является обязательным. Для пищевых продуктов животного происхождения, содержащих более 10 % жира, внутренние стандарты могут добавляться либо перед экстракцией, либо после экстракции жира. Должна быть проведена соответствующая проверка эффективности экстракции в зависимости от стадии внедрения внутренних стандартов и от того, сообщаются ли результаты на основе продукта или жира.

- Перед анализом ГХ/МС необходимо добавить 1 или 2 восстановительных (суррогатных) стандарта(а).

- Необходим контроль восстановления. Для подтверждающих методов восстановление отдельных внутренних стандартов должно находиться в диапазоне от 60 % до 120 %. Более низкие или более высокие степени извлечения отдельных конгенеров, в частности некоторых гепта- и октахлорированных дибензодиоксинов и дибензофуранов, приемлемы при условии, что их вклад в значение ТЭ не превышает 10 % от общего значения ТЭ (в пересчете на ПХДД/Ф). только). Для методов скрининга степень извлечения должна находиться в диапазоне от 30 % до 140 %.

- Отделение диоксинов от мешающих хлорированных соединений, таких как ПХД и хлорированные дифениловые эфиры, следует проводить с помощью подходящих хроматографических методов (предпочтительно с использованием колонок с флорисилом, оксидом алюминия и/или углерода).

- Газохроматографическое разделение изомеров должно быть достаточным (<25 % от пика к пику между 1,2,3,4,7,8-HxCDF и 1,2,3,6,7,8-HxCDF).

- Определение следует проводить в соответствии с методом 1613 Агентства по охране окружающей среды, версия B: Тетра-окта-хлорированные диоксины и фураны методом изотопного разбавления HRGC/HRMS или другим способом с эквивалентными критериями эффективности.

- Разница между верхним и нижним предельным уровнем не должна превышать 20 % для пищевых продуктов с загрязнением диоксинами около 1 пг ВОЗ-TEQ/г жира (только на основе ПХДД/ПХДФ). К пищевым продуктам с низким содержанием жира должны применяться те же требования к уровню загрязнения около 1 пг ВОЗ-TEQ/г продукта. Для более низких уровней загрязнения, например 0,50 пг ВОЗ-TEQ/г продукта, разница между верхним и нижним уровнями может находиться в диапазоне от 25 до 40%.

7. Скрининговые методы анализа

7.1. Введение

С использованием метода скрининга можно использовать различные аналитические подходы: метод чистого скрининга и количественный подход.

Подход к скринингу

Реакция образцов сравнивается с реакцией эталонного образца на интересующем уровне. Образцы с ответом ниже эталонного объявляются отрицательными, образцы с более высоким ответом считаются положительными. Требования:

- В каждую серию испытаний должны быть включены холостой образец и эталонный образец(ы), которые извлекаются и тестируются одновременно в идентичных условиях. Эталонный образец должен демонстрировать явно повышенную реакцию по сравнению с контрольным образцом.

- Должны быть включены дополнительные эталонные образцы 0,5 × и 2 × уровень интереса, чтобы продемонстрировать правильное проведение теста в интересующем диапазоне для контроля уровня интереса.

- При тестировании других матриц необходимо продемонстрировать пригодность эталонного образца(ов), предпочтительно путем включения образцов, которые, по данным HRGC/HRMS, содержат уровень TEQ, близкий к уровню эталонного образца, или же холостой образец с повышенным содержанием на этом уровне.

- Поскольку в биоанализах нельзя использовать внутренние стандарты, тесты на повторяемость очень важны для получения информации о стандартном отклонении в пределах одной серии тестов. Коэффициент вариации должен быть ниже 30%.

- Для биоанализов следует определить целевые соединения, возможные помехи и максимально допустимые уровни холостого контроля.

Количественный подход

Количественный подход требует стандартных серий разведений, двойной или тройной очистки и измерения, а также холостого контроля и контроля извлечения. Результат может быть выражен как TEQ, при этом предполагается, что соединения, ответственные за сигнал, соответствуют принципу TEQ. Это можно сделать с помощью ТХДД (или стандартной смеси диоксина и фурана) для получения калибровочной кривой для расчета уровня ТЭ в экстракте и, следовательно, в образце. Впоследствии это корректируется на уровень TEQ, рассчитанный для холостого образца (для учета примесей от используемых растворителей и химикатов), и на извлечение (рассчитанное на основе уровня TEQ в образце контроля качества вблизи интересующего уровня). Важно отметить, что часть видимых потерь при восстановлении может быть обусловлена ​​матричными эффектами и/или различиями между значениями TEF в биоанализах и официальными значениями TEF, установленными ВОЗ.

7.2. Требования к методам анализа, используемым для скрининга

- Для скрининга могут использоваться методы анализа ГХ/МС и биоанализы. Для методов ГХ/МС должны использоваться требования, изложенные в пункте 6. Особые требования для клеточных биоанализов изложены в пункте 7.3, а для биоанализов на основе наборов – в пункте 7.4.

- Необходима информация о количестве ложноположительных и ложноотрицательных результатов большого набора образцов ниже и выше максимального уровня или уровня действия по сравнению с содержанием TEQ, определенным подтверждающим методом анализа. Фактический уровень ложноотрицательных результатов должен быть ниже 1%. Частота ложноположительных результатов должна быть достаточно низкой, чтобы использование инструмента скрининга было выгодным.

- Положительные результаты всегда должны быть подтверждены подтверждающим методом анализа (HRGC/HRMS). Кроме того, образцы из широкого диапазона TEQ должны быть подтверждены методом HRGC/HRMS (примерно от 2% до 10% отрицательных образцов). Информация о соответствии между результатами биоанализа и результатами HRGC/HRMS должна быть доступна.

7.3. Особые требования к клеточным биоанализам

- При проведении биологического анализа каждый тест требует серии эталонных концентраций ТХДД или смеси диоксина/фурана (полная кривая зависимости доза-эффект с R2 > 0,95). Однако в целях скрининга можно использовать расширенную кривую низкого уровня для анализа проб с низким уровнем.

- Для получения результатов биоанализа за постоянный период времени следует использовать эталонную концентрацию ТХДД (около 3 × предел количественного определения) в листе контроля качества. Альтернативой может быть относительная реакция эталонного образца по сравнению с калибровочной линией TCDD, поскольку реакция клеток может зависеть от многих факторов.

- Таблицы контроля качества (КК) для каждого типа эталонного материала должны быть записаны и проверены, чтобы убедиться, что результат соответствует установленным рекомендациям.

- В частности, для количественных расчетов индукция используемого разведения образца должна находиться в пределах линейной части кривой отклика. Образцы, находящиеся выше линейной части кривой отклика, должны быть разбавлены и протестированы повторно. Поэтому рекомендуется тестировать не менее трех или более разведений одновременно.

- Процентное стандартное отклонение не должно превышать 15 % при трехкратном определении для каждого разведения образца и не превышать 30 % между тремя независимыми экспериментами.

- Предел обнаружения может быть установлен как 3 × стандартное отклонение холостого раствора растворителя или фонового отклика. Другой подход заключается в применении отклика, превышающего фоновый (коэффициент индукции 5 × холостой растворитель), рассчитанный на основе калибровочной кривой дня. Предел количественного определения может быть установлен в размере от 5 × до 6 × стандартное отклонение холостого раствора растворителя или фонового отклика, или применять отклик, превышающий фон (коэффициент индукции 10 × холостой растворитель), рассчитанный по калибровочной кривой день.

7.4. Особые требования к биоанализам на основе наборов(1)

- Необходимо следовать инструкциям производителя по подготовке проб и проведению анализов.

- Тест-наборы не следует использовать после истечения срока годности.

- Не следует использовать материалы или компоненты, предназначенные для использования с другими комплектами.

- Тестовые наборы следует хранить в указанном диапазоне температур хранения и использовать при указанной рабочей температуре.

- Предел обнаружения для иммуноанализа определяется как 3 × стандартное отклонение, основанное на 10 повторных анализах бланка, которое нужно разделить на значение наклона уравнения линейной регрессии.

- Эталонные стандарты следует использовать для испытаний в лаборатории, чтобы убедиться, что чувствительность к стандарту находится в допустимых пределах.

8. Отчет о результате

Насколько позволяет используемая аналитическая процедура, результаты анализа должны содержать уровни отдельных конгенеров ПХДД/Ф и ПХБ и сообщаться как нижний, верхний и средний пределы, чтобы включить максимум информации в отчет о результатах и тем самым позволяя интерпретировать результаты в соответствии с конкретными требованиями.

В отчете также следует указать содержание липидов в образце, а также метод, использованный для экстракции липидов.

Восстановление отдельных внутренних стандартов должно быть доступно в случае, если восстановление выходит за пределы диапазона, указанного в пункте 6, в случае превышения максимального уровня и в других случаях по запросу.

(1) До сих пор не было представлено никаких доказательств того, что коммерчески доступные биоанализы на основе наборов, обладающие достаточной чувствительностью и надежностью, чтобы их можно было использовать для скрининга на наличие диоксинов в необходимых уровнях в образцах пищевых продуктов и кормов.