Восьмая Директива Комиссии 78/633/EEC от 15 июня 1978 г., устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов.

ДИРЕКТИВА ВОСЬМОЙ КОМИССИИ от 15 июня 1978 г., устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов (78/633/EEC)

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 70/373/EEC от 20 июля 1970 г. о введении методов Сообщества отбора проб и анализа для официального контроля кормов (1), с последними поправками, внесенными Актом о присоединении, и, в частности, статьей 2 из них,

Принимая во внимание, что данная Директива требует, чтобы официальный контроль кормов проводился с использованием методов отбора проб и анализа Сообщества с целью проверки соответствия требованиям, возникающим в соответствии с положениями, установленными законом, нормативными актами или административными действиями, касающимися качества и состава кормов. ;

Принимая во внимание, что Директивы Комиссии 71/250/EEC от 15 июня 1971 г. (2), 71/393/EEC от 18 ноября 1971 г. (3), 72/199/EEC от 27 апреля 1972 г. (4), 73/46/EEC от 5 декабря 1972 г. (5), 74/203/EEC от 25 марта 1974 г. (6), 75/84/EEC от 20 декабря 1974 г. (7) и 76/372/EEC от 1 марта 1976 г. (8) уже установили количество методов анализа Сообщества; тогда как ход работы с тех пор делает целесообразным принять восьмой набор методов;

Принимая во внимание, что меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по кормам,

ПРИНЯЛ ЭТУ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

1. Государства-члены должны требовать, чтобы анализы для официального контроля кормов в отношении содержания в них цинка, бацитрацина, флавофосфолипола, железа, меди, марганца и цинка проводились в соответствии с методами, описанными в Приложении к настоящей Директиве. .

2. Общие положения, изложенные в Части 1 «Введение» Приложения к Первой Директиве 71/250/EEC, за исключением части, касающейся подготовки пробы для анализа, должны применяться к описанным методам. в Приложении к настоящей Директиве.

Статья 2

Государства-члены должны 1 января 1979 г. ввести в действие законы, постановления или административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы. Они должны немедленно уведомить об этом Комиссию.

Статья 3

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 15 июня 1978 г.

Для Комиссии

Финн ГУНДЕЛАХ

Вице-президент (1)ОЖ № L 170, 3.8.1970, с. 2. (2)ОЖ № L 155, 12 июля 1971 г., с. 13. (3)ОЖ № L 279, 20.12.1971, с. 7. (4)ОЖ № L 123, 29 мая 1972 г., с. 6. (5)ОЖ № L 83, 30.3.1973, с. 21. (6)ОЖ № L 108, 22.04.1974, с. 7. (7)ОЖ № L 32, 5 февраля 1975 г., с. 26. (8)ОЖ № L 102, 15 апреля 1976 г., с. 8.

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИНКА БАЦИТРАЦИНА МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАРНОЙ СРЕДЕ

1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ

Метод предназначен для определения бацитрацина цинка в кормах, концентратах и ​​премиксах. Нижний предел определения — 5 мг/кг (5 ppm) (*). Метод недействителен при наличии мешающих веществ, особенно больших количеств меди и аскорбиновой кислоты.

2. ПРИНЦИП

Пробу экстрагируют при pH 2 смесью метанола/воды/соляной кислоты. Экстракт доводят до pH 6-75, концентрируют (при необходимости) и разбавляют. Его антибиотическую активность определяют путем измерения диффузии бацитрацина цинка в агаризованной среде, инокулированной Micrococcus luteus (Syn. M. flavus). Диффузия проявляется образованием зон ингибирования микроорганизма. Диаметр этих зон принимают прямо пропорциональным логарифму концентрации антибиотика в диапазоне используемых концентраций антибиотика.

3. МИКРООРГАНИЗМ: MICROCOCCUS LUTEUS ATCC 10240 3.1. Поддержание фондовой культуры

Инокулируют Micrococcus luteus на агаровые откосы культуральной среды (4.1). Инкубируйте в течение 24 часов при температуре от 30 до 37 ºC, храните в холодильнике при температуре около 4 ºC и повторно инокулируйте каждые две недели на склоны агара.

>PIC ФАЙЛ="T0013288">

4. КУЛЬТУРНЫЕ СРЕДА И РЕАГЕНТЫ 4.1 Культуральная среда (b) >PIC FILE="T9001028">

4.2 Аналитическая среда (b) >PIC FILE="T9001029">

4.3 Раствор хлорида натрия 0,78 % (мас./об.): растворяют 8 г хлорида натрия а.к. в воде и разбавьте до 1 000 мл; стерилизовать.

4.4 Смесь метанола чистого/воды/соляной кислоты а.п. (д: от 1718 до 1719): 80/17 75/2 75 (об/об/об). (*) 1 мг бацитрацина цинка для корма эквивалентен 42 международным единицам (МЕ). (а) Могут использоваться другие методы при условии, что установлено, что они дают аналогичные бактериальные суспензии. (б) Можно использовать любую коммерческую питательную среду аналогичного состава, дающую такие же результаты.

Калий гидрофосфат K2HPO4 а.п. (22 715 г).

Калий дигидрофосфат KH2PO4 а.п. (27 785 г).

Вода до 1 000 мл.

5. СТАНДАРТНЫЕ РЕШЕНИЯ

Отвешивают количество стандартного цинк-бацитрацина (4.10), соответствующее 1 050 ед. (в соответствии с указанным видом деятельности). Добавляют 5 мл 0,71 N соляной кислоты (4.7) и оставляют на 15 минут. Добавьте 30 мл воды, доведите pH до 4–75 с помощью фосфатного буфера pH 6–75 (4,5) (около 4 мл), доведите объем водой до 50 мл и хорошо перемешайте (1 мл = 21 ед.).

Из этого раствора приготовьте последовательным разбавлением фосфатным буфером pH 6 75 (4,5) следующие растворы: >PIC FILE="T0013289">

6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЭКСТРАКТА 6.1. Экстракция 6.1.1. Концентраты, премиксы и минеральные корма

Взвесьте образец от 2 70 до 5 70 г, добавьте 30 мл смеси (4.4) и кратковременно встряхните. Убедитесь, что pH составляет около 2. Встряхивайте 10 минут, добавьте 30 мл фосфатного буфера pH 6 75 (4,5) и встряхивайте 15 минут. Разбавьте фосфатным буфером (4.5) до получения ожидаемого содержания бацитрацина цинка 0,742 МЕ/мл) (= U8).

Взвесьте образец 10–70 г, добавьте 50 мл смеси (4.4) и кратковременно встряхните. Убедитесь, что pH составляет около 2. Встряхивайте 10 минут, добавьте 50 мл фосфатного буфера pH 6 75 (4,5) и встряхивайте 15 минут. Разбавьте фосфатным буфером (4.5) до получения ожидаемого содержания бацитрацина цинка 0,742 МЕ/мл (= U8).

Отвесьте образец 10,70 г (20,70 г для ожидаемого содержания бацитрацина цинка 5 мг/кг), добавьте 25 мл смеси (4.4) и гомогенизируйте в течение примерно 10 минут. Добавьте 25 мл фосфатного буфера pH 6-75 (4,5), встряхивайте 15 минут и центрифугируйте. Берут 20 мл надосадочного раствора и доводят pH до 6,75 с помощью 1 N раствора гидроксида натрия (4.8), используя раствор бромкрезолового пурпурного (4.9) в качестве индикатора. Выпарить примерно до 4 мл в роторном испарителе при температуре не выше 35 ºC. Разбавьте остаток водой до получения ожидаемого содержания бацитрацина цинка 0,742 МЕ/мл (= U8).

Из раствора U8 готовят растворы U4 (ожидаемое содержание: 0,721 МЕ/мл), U2 (ожидаемое содержание: 0,7105 МЕ/мл) и U1 (ожидаемое содержание: 0,70525 МЕ/мл) путем последовательного разведения (1). +1) с фосфатным буфером (4.5).

7. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 7.1. Инокуляция аналитической среды

Инокулируют среду для анализа (4.2) бактериальной суспензией (3.2) при температуре около 50 ºC. Путем предварительных испытаний на чашках с аналитической средой (4.2) определяют количество бактериальной суспензии, необходимое для получения наиболее крупных и четких зон ингибирования при различных концентрациях цинк-бацитрацина.

Диффузию через агар проводят в чашках с четырьмя концентрациями стандартного раствора (S8, S4, S2,S1) и четырьмя концентрациями анализируемого раствора (U8, U4, U2, U1). Эти четыре концентрации экстракта и стандарта обязательно должны быть помещены в каждую чашку. Для этого подбирают чашки достаточно большого размера, чтобы в агаровой среде можно было сделать не менее восьми отверстий диаметром от 10 до 13 мм и расстоянием между центрами не менее 30 мм. Испытание может проводиться на пластинах, состоящих из листа стекла с помещенным сверху алюминиевым или пластиковым кольцом диаметром 200 мм и высотой 20 мм.

Налейте в чашки некоторое количество среды (4.2), инокулированной, как указано в пункте 7.1, так, чтобы получился слой толщиной около 2 мм (50 мл для чашки диаметром 200 мм). Дайте установить в ровное положение, просверлите отверстия и поместите в них точно отмеренные объемы аналитического и стандартного растворов (от 0,710 до 0,715 мл на отверстие, в зависимости от диаметра).

Применяйте каждую концентрацию не менее четырех раз, чтобы каждое определение подвергалось оценке 32 зон ингибирования.

Инкубируйте чашки в течение 16–18 часов при температуре 28–30 ºC.

8. ОЦЕНКА

Измерьте диаметр зон торможения с точностью до 0,71 мм. Запишите средние значения для каждой концентрации на полулогарифмической миллиметровой бумаге, показывая логарифм концентраций по отношению к диаметрам зон ингибирования. Постройте линии наилучшего соответствия как стандартного решения, так и экстракта, например, как показано ниже.

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного нижнего уровня (SL) по формуле: >PIC FILE="T0013290">

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного наивысшего уровня (SH) по формуле: >PIC FILE="T0013291">

Аналогичным образом рассчитайте точки «наилучшего соответствия» для самого низкого уровня экстракта (UL) и самого высокого уровня экстракта (UH), заменив U1, U2, U4 и U8 на S1, S4 и S8 в приведенных выше формулах.

Запишите рассчитанные значения SL и SH на одной миллиметровой бумаге и соедините их, чтобы получить линию «наилучшего соответствия» для стандартного решения. Аналогично запишите UL и UH и соедините их, чтобы получить строку, наиболее подходящую для фрагмента.

При отсутствии каких-либо помех линии должны быть параллельны. Для практических целей линии можно считать параллельными, если значения (SH-SL) и (UH-UL) не отличаются более чем на 10 % от своего среднего значения.

Если окажется, что линии непараллельны, либо U1 и S1, либо U8 и S8 можно отбросить и рассчитать SL, SH, UL и UH с использованием альтернативных формул, чтобы получить альтернативные «наилучшие подходящие» линии: > PIC-ФАЙЛ="T0013292">

и аналогично для UL и UH. Альтернативные линии наилучшего соответствия должны быть проверены на параллельность, как и раньше. Тот факт, что результат был рассчитан по трем уровням, должен быть отмечен в итоговом отчете.

Если линии считаются параллельными, вычислите логарифм относительной активности (лог. А) с помощью одной из следующих формул.

Для четырех уровней >PIC FILE="T0013293">

Для трех уровней >PIC FILE="T0013294">

Реальная активность = предполагаемая активность × относительная активность.

Если линии считаются непараллельными, повторите определение. Если параллелизм все же не достигнут, вычислите логарифм относительной активности (лог. А) по формуле (в). Однако полученный результат следует рассматривать как приблизительный, и это следует отметить в итоговом отчете.

9. ПОВТОРЯЕМОСТЬ

Разница между результатами двух определений, проведенных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать:

20 % относились к наибольшему значению для содержания цинк-бацитрацина от 5 до 25 мг/кг;

5 мг/кг по абсолютной величине для содержания от 25 до 50 мг/кг;

10 % относятся к самому высокому значению для содержания выше 50 мг/кг.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОФОСФОЛИПОЛА МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАРНОЙ СРЕДЕ

1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ

Метод предназначен для определения флавофосфолипола в кормах, концентратах и ​​премиксах. Нижний предел определения – 1 мг/кг (1 ppm).

2. ПРИНЦИП

Пробу экстрагируют разбавленным метанолом путем нагревания с обратным холодильником. После центрифугирования экстракт очищают (при необходимости) обработкой ионообменными смолами и разбавляют. Его антибиотическую активность определяют путем измерения диффузии флавофосфолипола в агаризованной среде, инокулированной Staphylococcus aureus. Диффузия проявляется образованием зон ингибирования микроорганизма. Диаметр этих зон принимают прямо пропорциональным логарифму концентрации антибиотика в диапазоне используемых концентраций антибиотика.

3. МИКРООРГАНИЗМ: STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC 6538 P 3.1. Поддержание фондовой культуры

Инокулируют Staphylococcus aureus на агаровые откосы культуральной среды (4.1). Инкубируйте в течение 24 часов при 37 ºC, храните в холодильнике при температуре около 4 ºC и повторно инокулируйте каждый месяц на склоны агара.

Отложите две пробирки с исходной культурой (3.1) и засеивайте их еженедельно. Инкубируйте 24 часа при температуре 37 ºC и храните в холодильнике при температуре около 4 ºC.

За 24 часа до анализа инокулируют этим ростом две-четыре пробирки, содержащие откосы культуральной среды (4.1). Инкубируйте в течение 16–18 часов при температуре 37 ºC. Делают суспензию роста в растворе хлорида натрия (4.3). Светопропускание суспензии должно составлять около 40 %, измеренное при длине волны 578 нм в ячейке размером 1 см относительно раствора хлорида натрия (4.3).

(а) Могут использоваться другие методы при условии, что установлено, что они дают аналогичные бактериальные суспензии. >PIC ФАЙЛ="T0013295">

>PIC FILE="T0013296">

7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЭКСТРАКТА 7.1. Экстракция 7.1.1. Концентраты, премиксы и минеральные корма

Отвешивают пробу массой от 2 70 до 5 70 г и добавляют около 150 мг аскорбиновой кислоты (4.13). Гомогенизируют со 150 мл 50%-ного метанола (4.5) в конической колбе (5.3) и доводят pH до значения от 8,71 до 8,72 с помощью примерно 400 мг трис(гидроксиметил)аминометана (4.7). Проверьте pH с помощью индикаторной бумаги (4.12). Дают постоять 15 минут, затем доводят pH до 8,71-8,72 с помощью трис(гидроксиметил)аминометана (4.7) и кипятят 10 минут с обратным холодильником (5.4) при постоянном перемешивании. Дать остыть, центрифугировать смесь и декантировать экстракт.

Отвесьте образец от 5,70 до 30,70 г, содержащий не менее 30 мкг флавофосфолипола. Гомегенизируют с помощью 150 мл 50%-ного метанола (4.5) в конической колбе (5.3) и доводят pH до значения от 8,71 до 8,72 с помощью примерно 400 мг трис(гидроксиметил)аминометана (4.7). Проверьте pH с помощью индикаторной бумаги (4.12). Дают постоять 15 минут, затем доводят pH до 8,71-8,72 с помощью трис(гидроксиметил)аминометана (4.7) и кипятят 10 минут с обратным холодильником (5.4) при постоянном перемешивании. Дать остыть, центрифугировать смесь и декантировать экстракт.

Вставьте пробку из стекловаты (4.11) в нижний конец стеклянной трубки (5.1), налейте в трубку 5 мл анионита (4.10) и промойте колонку 100 мл 80 % метанола (4.6). . С помощью воронки (5.2) переносят в колонку фильтрат объемом не менее 100 мл, который должен содержать 16 мкг флавофосфолипола (200 мл на 30 г образца корма при концентрации 1 ppm). При необходимости перед внесением в колонку фильтрат разбавляют 80 % метанолом (4.6) до получения ожидаемого содержания флавофосфолипола 16 мкг/100 мл. Отрегулируйте скорость потока примерно до 2 мл/мин. Выбросьте сточные воды. Затем промывают колонку 50 мл 80% метанола (4.6) и сливают эффлюент.

Элюируйте флавофосфолипол метанольным раствором хлорида калия (4.8), поддерживая скорость потока около 2 мл/мин. Соберите 50 мл элюата в градуированную колбу, добавьте 30 мл воды и перемешайте. Этот раствор должен иметь содержание флавофосфолипола 0,72 мкг/мл (= U8).

При необходимости (т. е. если этап очистки пропущен), разбавьте экстракт, полученный в пункте 7.1.1, 50 % метанола (4.5) до получения ожидаемого содержания флавофосфолипола 0,72 мкг/мл (= U8).

Из раствора U8 готовят растворы U4 (ожидаемое содержание: 0,71 мкг/мл), U2 (ожидаемое содержание: 0,705 мкг/мл) и U1 (ожидаемое содержание: 0,7025 мкг/мл) путем последовательного разбавление (1+1) 50 % метанолом (4,5).

8. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА 8.1. Инокуляция аналитической среды

Инокулируют среду для анализа (4.2.2) бактериальной суспензией (3.2) при температуре около 50 ºC. Путем предварительных испытаний на чашках с аналитической средой (4.2.2) определяют количество бактериальной суспензии, необходимое для образования наиболее крупных и четких зон ингибирования при различных концентрациях флавофосфолипола (около 30 мл/л).

Диффузию через агар проводят в чашках с четырьмя концентрациями стандартного раствора (S8, S4, S2, S1) и четырьмя концентрациями анализируемого раствора (U8, U4, U2, U1). Эти четыре концентрации экстракта и стандарта обязательно должны быть помещены в каждую чашку. Для этого выбирают чашки достаточно большого размера, чтобы в агаровой среде можно было сделать не менее восьми отверстий диаметром от 10 до 13 мм и расстоянием между центрами не менее 30 мм. Испытание может проводиться на пластинах, состоящих из листа стекла с помещенным сверху алюминиевым или пластиковым кольцом диаметром 200 мм и высотой 20 мм.

Наливают в чашки определенное количество среды (4.2.1) так, чтобы получился слой толщиной около 175 мм (45 мл для чашки диаметром 200 мм). Дайте ему застыть в горизонтальном положении, а затем нанесите на него определенное количество среды (4.2.2), инокулированной, как указано в пункте 8.1, чтобы получить слой толщиной 1 мм (30 мл для чашки диаметром 200 мм). Дайте ему снова выровняться, просверлите отверстия и поместите в них точно отмеренные объемы аналитического и стандартного растворов (от 0,710 до 0,715 мл на отверстие, в зависимости от диаметра).

Применяйте каждую концентрацию не менее четырех раз, чтобы каждое определение подвергалось оценке 32 зон ингибирования.

Инкубируйте чашки в течение 16–18 часов при температуре 28–30 ºC.

9. ОЦЕНКА

Измерьте диаметр зон торможения с точностью до 0,71 мм. Запишите средние значения для каждой концентрации на полулогарифмической миллиметровой бумаге, показывая логарифм концентраций по отношению к диаметрам зон ингибирования. Постройте линии наилучшего соответствия как стандартного решения, так и экстракта, например, как показано ниже.

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного нижнего уровня (SL) по формуле: >PIC FILE="T0013297">

Аналогичным образом рассчитайте точки «наилучшего соответствия» для самого низкого уровня экстракта (UL) и самого высокого уровня экстракта (UH), заменив U1, U2, U4 и U8 на S1, S2, S4 и S8 в приведенных выше формулах.

Запишите рассчитанные значения SL и SH на одной миллиметровой бумаге и соедините их, чтобы получить линию «наилучшего соответствия» для стандартного решения. Аналогично запишите UL и UH и соедините их, чтобы получить строку, наиболее подходящую для фрагмента.

При отсутствии каких-либо помех линии должны быть параллельны. Для практических целей линии можно считать параллельными, если значения (SH-SL) и (UH-UL) не отличаются более чем на 10 % от своего среднего значения.

Если окажется, что линии непараллельны, либо U1 и S1, либо U8 и S8 можно отбросить и рассчитать SL, SH, UL и UH с использованием альтернативных формул, чтобы получить альтернативные «наилучшие подходящие» линии: > PIC-ФАЙЛ="T0013298">

и аналогично для UL и UH. Альтернативные линии наилучшего соответствия должны быть проверены на параллельность, как и раньше. Тот факт, что результат был рассчитан по трем уровням, должен быть отмечен в итоговом отчете.

Если линии считаются параллельными, вычислите логарифм относительной активности (лог. А) с помощью одной из следующих формул.

Для четырех уровней >PIC FILE="T0013299">

Для трех уровней >PIC FILE="T0013300">

Реальная активность = предполагаемая активность × относительная активность.

Если линии считаются непараллельными, повторите определение. Если параллелизм все же не достигнут, вычислите логарифм относительной активности (лог. А) по формуле (в). Однако полученный результат следует рассматривать как приблизительный, и это следует отметить в итоговом отчете.

10. ПОВТОРЯЕМОСТЬ

Разница между результатами двух определений, проведенных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать:

0,75 мг/кг, по абсолютной величине, для содержания флавофосфолипола от 1 и до 2 мг/кг;

25 % относятся к самому высокому значению для содержания от 2 до 10 мг/кг;

20 % относятся к самому высокому значению для содержания от 10 до 25 мг/кг;

5 мг/кг по абсолютной величине для содержания от 25 до 50 мг/кг;

10 % относятся к самому высокому значению для содержания выше 50 мг/кг.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ ЖЕЛЕЗА, МЕДИ, МАРГАНЕЦА И ЦИНК

1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ

Метод позволяет определять в кормах микроэлементы железо, медь, марганец и цинк. Нижние пределы определения:

железо (Fe): 20 мг/кг

медь (Cu): 10 мг/кг

марганец (Mn): 20 мг/кг

цинк (Zn): 20 мг/кг

2. ПРИНЦИП

Проба растворяется в соляной кислоте после разрушения органических веществ, если таковые имеются. Элементы железо, медь, марганец и цинк определяются после соответствующего разбавления методом атомно-абсорбционной спектрометрии.

3. РЕАГЕНТЫ

Вступительные комментарии

Для приготовления реактивов и аналитических растворов используют воду, свободную от определяемых катионов, полученную либо двойной перегонкой воды в боросиликатном стекле или кварцевом перегонном аппарате, либо двойной обработкой на ионообменной смоле.

Реагенты должны быть не ниже аналитической чистоты (а.п.). Свободу от определяемого элемента необходимо проверять в холостом эксперименте. При необходимости реагенты подлежат дополнительной очистке.

Вместо стандартных решений, описанных ниже, можно использовать коммерческие стандартные решения при условии, что на них распространяется гарантия и они проверены перед использованием. 3.1. Соляная кислота а.п. (д: 1 719).

4. АППАРАТ 4.1. Муфельная печь с регулировкой температуры и самописцем.

5. ПОРЯДОК 5.1. Пробы, содержащие органические вещества 5.1.1. Озоление и подготовка раствора к анализу (*) (i) От 5 до 10 г образца массой с точностью до 0,72 мг помещают в кварцевый или платиновый тигель (4.3) (см. примечание (б)), сушат в печи при температуре 105 ºC и помещают тигель в холодную муфельную печь (4.1). Закройте печь (см. примечание (с)) и постепенно повышайте температуру до 450–475 ºC в течение примерно 90 минут. Поддерживайте эту температуру в течение 4–16 часов (например, в течение ночи), чтобы удалить углеродистый материал, а затем откройте печь и дайте ей остыть (см. примечание (d)).

Промойте тигель примерно 5 мл соляной кислоты (3.1) и медленно и осторожно добавьте ее в химический стакан (может произойти бурная реакция из-за CO2 (*)Зеленый корм (свежий или сушеный) может содержать большое количество растительного кремнезема, который может удерживать микроэлементы и должен быть удален. Поэтому для образцов этих кормов необходимо соблюдать следующую модифицированную процедуру. Выполните операцию 5.1.1 (i) до момента фильтрации. Фильтровальную бумагу, содержащую нерастворимый остаток, дважды промывают кипящей водой и помещают в платиновый тигель (4.3). Прокаливают в муфельной печи (4.1) при температуре ниже 550 °С до полного исчезновения всего углеродистого материала. Дают остыть, добавьте несколько капель воды, а затем 10–15 мл плавиковой добавки (3.4) и выпарите досуха при температуре около 150 ° C. Если в остатке останется кремнезем, повторно растворите его в нескольких миллилитрах плавиковой добавки (3.4) и выпарите до Добавьте пять капель серной кислоты (3,5) и нагревайте до тех пор, пока не перестанут выделяться белые пары. После прибавления 5 мл 6 н. соляной кислоты (3.2) и около 30 мл воды нагревают, раствор фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят водой до метки (концентрация HCl около 0,75 н). Далее приступайте к определению, начиная с пункта 5.1.3. формирование). Добавляют по каплям соляную кислоту (3.1) при перемешивании до прекращения шипения. Выпарить досуха, время от времени помешивая стеклянной палочкой.

Затем к остатку добавляют 15 мл 6 н. соляной кислоты (3.2), а затем около 120 мл воды. Перемешайте стеклянной палочкой, которую следует оставить в стакане, и накройте стакан часовым стеклом. Осторожно доведите до кипения и поддерживайте эту температуру до тех пор, пока не перестанет растворяться пепел. Фильтруют на беззольной фильтровальной бумаге и собирают фильтрат в мерную колбу емкостью 250 мл. Промойте стакан и фильтр 5 мл горячей 6 н. соляной кислоты (3.2) и дважды кипятком. Наполните мерную колбу до метки водой (концентрация HCl около 0,75 Н).

(ii) Если остаток в фильтре выглядит черным (углерод), поместите его обратно в печь и снова озолите при температуре от 450 до 475 ºC. Это озоление, которое занимает всего несколько часов (около трех-пяти часов), завершается, когда зола становится белой или почти белой. Остаток растворяют примерно в 2 мл соляной кислоты (3.1), выпаривают досуха и добавляют 5 мл 6 н. соляной кислоты (3.2). Нагрейте, отфильтруйте раствор в мерную колбу и доведите водой до метки (концентрация HCl около 0,75 Н).

Примечания: (a) При определении микроэлементов важно учитывать риски загрязнения, особенно цинком, медью и железом. По этой причине оборудование, используемое при подготовке проб, не должно содержать этих металлов.

Чтобы снизить общий риск загрязнения, работайте в атмосфере, свободной от пыли, с тщательно чистым оборудованием и тщательно вымытой стеклянной посудой. Определение цинка особенно чувствительно ко многим типам загрязнений, например. от стеклянной посуды, реактивов, пыли и т.п.

(b) Вес пробы, подлежащей золе, рассчитывается на основе приблизительного содержания микроэлементов в корме в зависимости от чувствительности используемого спектрофотометра. Для некоторых кормов с низким содержанием микроэлементов может оказаться необходимым начать с пробы весом 10–20 г и довести конечный раствор до объема всего лишь 100 мл.

(c) Озоление должно проводиться в закрытой печи без подачи воздуха или кислорода.

(d) Температура, показываемая пирометром, не должна превышать 475 ºC.

Для каждого из определяемых элементов приготовьте из рабочих стандартных растворов, указанных в пунктах 3.7.1, 3.8.1, 3.9.1 и 3.10.1, ряд калибровочных растворов, причем каждый калибровочный раствор имеет концентрацию HCl около 0,75 N и (в случае железа, марганца и цинка) концентрация хлорида лантана, эквивалентная 0,71% La (мас./об.). Выбранные концентрации микроэлементов должны находиться в пределах чувствительности используемого спектрофотометра. В таблицах ниже в качестве примера показаны составы типичных диапазонов калибровочных растворов; однако в зависимости от типа и чувствительности используемого спектрофотометра может возникнуть необходимость выбора других концентраций. >PIC ФАЙЛ="T0013301">

>PIC ФАЙЛ="T0013302">

Для определения меди обычно можно использовать непосредственно раствор, приготовленный в пункте 5.1.1. При необходимости доведения его концентрации до значений градуировочных растворов аликвотную часть можно отлить пипеткой в ​​мерную колбу вместимостью 100 мл и довести ее до метки 0,75 н соляной кислоты (3.3).

Для определения железа, марганца и цинка отнесите пипеткой аликвотную порцию раствора, приготовленного из пункта 5.1.1, в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавьте 10 мл раствора лантана хлорида (3.11) и доведите до метки меткой 0 75 Н соляная кислота (3.3) (см. также пункт 8 «Наблюдение»).

Холостой эксперимент должен включать все предписанные этапы процедуры, за исключением того, что образец материала опускается.

Калибровочный раствор «0» нельзя использовать в качестве холостого раствора.

Измерьте атомную абсорбцию калибровочных растворов и анализируемого раствора, используя окислительное воздушно-ацетиленовое пламя на следующих длинах волн: >PIC FILE="T0013303">

Выполните каждое измерение четыре раза.

Если проба не содержит органических веществ, предварительное озоление не требуется. Действуйте, как описано в пункте 5.1.1 (i), начиная со второго абзаца. Выпаривание с плавиковой кислотой можно не проводить.

6. ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Используя калибровочную кривую, рассчитайте концентрацию микроэлементов в анализируемом растворе и выразите результат в миллиграммах микроэлементов на килограмм образца (ppm).

7. ПОВТОРЯЕМОСТЬ

Разница между результатами двух параллельных определений, выполненных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать: - 5 мг/кг по абсолютной величине для содержания соответствующего микроэлемента до 50 мг/кг;

- 5 % от высшего результата для содержания соответствующего микроэлемента свыше 200 мг/кг.

8. НАБЛЮДЕНИЕ >PIC FILE="T0013304">