Директива Совета 67/427/EEC от 27 июня 1967 г. об использовании некоторых консервантов для обработки поверхности цитрусовых и о мерах контроля, которые должны использоваться для качественного и количественного анализа консервантов в цитрусовых и на них.

ДИРЕКТИВА СОВЕТА от 27 июня 1967 г. об использовании некоторых консервантов для обработки поверхности цитрусовых и о мерах контроля, которые должны использоваться для качественного и количественного анализа консервантов в цитрусовых и на них (67/427/EEC)

СОВЕТ ЕВРОПЕЙСКОГО ЭКОНОМИЧЕСКОГО СООБЩЕСТВА,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества, в частности его статью 100;

Принимая во внимание предложение Комиссии;

Принимая во внимание мнение Европейского парламента (1);

Принимая во внимание мнение Экономического и социального комитета (2);

Принимая во внимание, что в соответствии со статьей 5 Директивы Совета от 5 ноября 1963 г. (3) о сближении законов государств-членов, касающихся консервантов, разрешенных для использования в пищевых продуктах, предназначенных для потребления человеком, с последними поправками, внесенными статьей 1 Директива Совета от 14 декабря 1966 г. (4) Государства-члены ЕС могут до 30 июня 1967 г. сохранять в силе положения своих национальных законов, касающиеся обработки поверхности цитрусовых бифенилом (дифенилом), ортофенилфенолом и ортофенилфенатом натрия;

При этом использование этих веществ для обработки поверхности цитрусовых не представляет опасности для здоровья, если остаточное количество на килограмм цельных плодов не превышает 70 миллиграммов бифенила и 12 миллиграммов ортофенилфенола и ортофенилфената натрия, выраженное как ортофенилфенол;

Принимая во внимание, что проводимая обработка должна быть соответствующим образом указана на всех этапах маркетинга;

Принимая во внимание, что если три рассматриваемых вещества должны быть разрешены на уровне Сообщества, должны быть установлены общие правила для официального контроля обработанных цитрусовых;

Поскольку необходим переходный период, прежде чем положения настоящей Директивы смогут быть реализованы государствами-членами; поскольку положения национального законодательства, касающиеся обработки поверхности цитрусовых тремя рассматриваемыми консервантами, поэтому должны оставаться в силе до конца этого периода;

Поскольку государство-член не должно быть обязано разрешать использование консерванта в пищевых продуктах, производимых и потребляемых на его собственной территории, если нет технологических причин, оправдывающих такое использование;

ПРИНЯЛ ЭТУ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

В Директиву Совета от 5 ноября 1963 г. о сближении законодательства государств-членов относительно консервантов, разрешенных для использования в пищевых продуктах для потребления человеком, настоящим вносятся следующие поправки: 1. В статье 2 (2) во втором предложении заменить следующее:

Однако законодательство государства-члена может полностью исключить использование любого из консервантов, перечисленных в Приложении, только в том случае, если нет технологической причины для использования таких консервирующих пищевых продуктов, произведенных и потребляемых на его собственной территории».

2. К консервантам, перечисленным в разделе I Приложения, должны быть добавлены следующие консерванты: (1) OJ № 63, 3.4.1967, с. 990/67. (2) ОЖ № 64, 5 апреля 1967 г., с. 1005/67. (3) ОЖ № 12, 27 января 1964 г., с. 161/64. (4) ОЖ № 233, 20.12.1966, с. 3947/66 >PIC FILE="T0001696">

3. Подпункт (б) статьи 5 исключить.

Статья 2

Государства-члены должны принять все необходимые меры для обеспечения того, чтобы отбор проб, а также качественный и количественный анализ бифенила, ортофенилфенола и ортофенилфената натрия в цитрусовых и на них осуществлялся в соответствии с положениями Приложений I, II, III и IV к настоящей Директиве.

Статья 3

1. Государства-члены должны не позднее 1 июля 1968 г. ввести в силу меры, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, и немедленно проинформировать об этом Комиссию.

2. До 1 июля 1968 г. государства-члены могут сохранять в силе положения своих национальных законов, касающиеся обработки поверхности цитрусовых дифенилом, ортофенилфенолом и ортофенилфенатом натрия.

Статья 4

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 27 июня 1967 года.

За Совет

Президент

Р. ВАН ЭЛСЛАНДЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ I ПОРЯДОК ОТБОРА ПРОБ ЦИТРУСОВЫХ ФРУКТОВ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КОНСЕРВАНТОВ

А. Взятие проб

I. Пробы должны отбираться с использованием научных методов, которые гарантируют, что пробы являются репрезентативными для партии, подлежащей анализу.

2. Товары оптом >PIC FILE="T0001698">

Б. Упаковка и доставка образцов

1. Пробы должны быть помещены в герметичные контейнеры;

2. Контейнеры должны быть опломбированы;

3. Упакованные таким образом образцы должны быть доставлены как можно быстрее в испытательные лаборатории.

ПРИЛОЖЕНИЕ II КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ОСТАТКОВ БИФЕНИЛА, ОРТОФЕНИЛФЕНОЛА И ОРТФЕНИЛФЕНАТА НАТРИЯ В КОРКУ ЦИТРУСОВЫХ

1. Цель и сфера применения

Описанный ниже метод позволяет обнаружить остатки бифенила, ортофенилфенола (ОПФ) или ортофенилфената натрия в кожуре цитрусовых. Предел чувствительности этого метода в абсолютном выражении составляет примерно 5 мкг для бифенила и 1 миллиграмм для ОПФ или ортофенилфената натрия, что эквивалентно 5 ¶г бифенила (5 ppm) и 1 миллиграмму OPP (1 ppm). соответственно в кожуре 1 килограмма цитрусовых.

Когда цитрусовые обрабатываются вышеупомянутыми продуктами, отложившиеся остатки обнаруживаются в основном в кожуре фруктов. Поэтому количественный анализ таких остатков во всем фрукте представляется необходимым только в том случае, если они обнаружены в кожуре.

2. Принцип

Из кожуры готовят экстракт с использованием дихлорметана в кислой среде. Экстракт концентрируют и разделяют тонкослойной хроматографией с использованием силикагеля. Присутствие бифенила, ортофенилфенола или ортофенилфената натрия подтверждается флуоресцентными и цветными тестами.

3. Реагенты

циклогексан А.Р.

дихлорметан А.Р.

соляная кислота 25 % (мас./об.)

силикагель GF 254 Merck или эквивалент

0,5 % раствор 2,4,7-тринитрофлуоренона (Fluka, B.D.H или эквивалент) (TNF) в ацетоне

0,1 % раствор 2,6-дибромбензохинон-4-хлоримида в этаноле (стабилен до одной недели при хранении в холодильнике)

концентрированный раствор аммиака, у.г.: 0,9

стандартный 1 % раствор чистого бифенила в циклогексане

стандартный 1 % раствор чистого ортофенилфенола в циклогексане

4. Оборудование

микшер

Колба 250 мл с притертым стеклянным швом и охлаждаемым обратным холодильником

испаритель пониженного давления

микропипетки

Аппарат для тонкослойной хроматографии с пластинами размером 20 Х 20 см

У.В. лампа (254 нм): интенсивность должна быть такой, чтобы было видно пятно 5 мкг бифенила

оборудование для распыления реагентов

духовка

5. Метод

(a) Подготовка образца и экстракция

Все фрукты в образце для тестирования разрезаны пополам. Половину каждого плода оставляют для количественного определения остатков бифенила и/или ортофенилфенола. От остальных половинок берут кусочки кожуры, чтобы получить навеску около 80 граммов. Эти кусочки измельчают, измельчают в миксере и помещают в колбу емкостью 250 мл; к этому добавляют 1 мл 25%-ной соляной кислоты и 100 мл дихлорметана. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение десяти минут. После охлаждения и промывки конденсатора примерно 5 мл дихлорметана смесь фильтруют через рифленый фильтр. Раствор переносят в испаритель и добавляют пористые гранулы. Раствор концентрируют при пониженном давлении и температуре 60 ºC до конечного объема около 10 мл. Если используется ротационный испаритель, колбу следует держать в фиксированном положении во избежание потери дифенила за счет образования пленки продукта на верхней стенке колбы.

(б) Хроматография

30 граммов силикагеля и 60 мл воды помещают в миксер и перемешивают в течение одной минуты. Затем смесь выливают на 5 хроматографических тарелок и распределяют так, чтобы образовался слой толщиной примерно 0,250 мм. Пластины, покрытые этим слоем, подвергают в течение пятнадцати минут воздействию потока горячего воздуха, а затем помещают в печь, где выдерживают тридцать минут при температуре 110 ºC.

После охлаждения каждая пластина делится на полоски шириной 2 см параллельными линиями, пронизывающими покровный слой до поверхности пластины. 50 мкл анализируемого экстракта наносят рядом капель на каждую полоску на расстоянии примерно 1,5 см от края. Для контролей оставляют не менее одной полоски, состоящей из внесения 1 мкл (т. е. 10 мкг) стандартных растворов бифенила и ортофенилфенола.

Хроматографические пластинки проявляют в смеси циклогексана и дихлорметана (25 : 95) в чашках, предварительно выстланных фильтровальной бумагой.

(c) Обнаружение и идентификация

На наличие бифенила и ортофенилфенола указывает появление пятен в УФ-излучении. свет (254 нм). Ортофенилфенат натрия при экстракции в кислой среде превратился в ортофенилфенол, поэтому его присутствие невозможно отличить от присутствия ортофенилфенола. Продукты идентифицируются следующим образом: (i) дифенил дает желтое пятно при дневном свете при опрыскивании раствором TNF;

(ii) ортофенилфенол дает синее пятно при распылении раствора 2,6-дибромбентохинон-4-хлоримида с последующим быстрым прохождением через поток горячего воздуха и воздействием атмосферы, насыщенной аммиаком.

ПРИЛОЖЕНИЕ III КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ОСТАТКОВ БИФЕНИЛА В ЦИТРУСОВЫХ ФРУКТАХ

1. Цель и сфера применения

Описанный ниже метод дает количественный анализ остатков бифенила в цитрусовых (цельных фруктах). Точность метода составляет ± 10 % при содержании бифенила более 10 миллиграммов на килограмм фруктов (10 частей на миллион).

2. Принцип

После перегонки в кислой среде и экстракции циклогексаном экстракт хроматографируют в тонком слое на силикагеле. Хроматограмму проявляют, дифенил элюируют и определяют спектрофотометрически при 248 нм.

3. Реагенты

концентрированный раствор серной кислоты

Противовспенивающая эмульсия на основе силикона

циклогексан А.Р.

гексан А.Р.

этанол А.Р.

безводный сульфат натрия

силикагель GF 254 Merck или эквивалент

стандартный 1% раствор чистого бифенила в циклогексане: разбавьте циклогексаном, чтобы получить следующие три раствора:

(а) 0,6 г/л (б) 1 г/л (в) 1,4 г/л

4. Оборудование

1 миксер (объемом 1 литр)

2-литровая перегонная колба с модифицированным сепаратором типа Клевенджера (1) и охлаждаемым обратным холодильником

Градуированная колба на 10 мл (1) См. рисунок на стр. 180.

Микропипетки 50 л

Аппарат для тонкослойной хроматографии с пластинами 20 X 20 см

духовка

Центрифуга с коническими пробирками емкостью 15 мл

У.В. спектрофотометр

5. Метод (а) Подготовка пробы и экстракция

Все фрукты в образце для тестирования разрезаны пополам.

Половина каждого фрукта сохраняется для качественного анализа на наличие остатков бифенила, ОРФ или ортофенилфената натрия. Остальные половинки соединяют все вместе и измельчают в мельнице или измельчают до получения однородной смеси. Из него отбирают по меньшей мере две подпробы по 200 граммов для анализа следующим образом. Каждый подобразец помещают в миксер со 100 мл воды и перемешивают на низкой скорости в течение нескольких секунд. Воду добавляют до тех пор, пока объем смеси не достигнет трех четвертей емкости миксера, затем смесь перемешивают в течение пяти минут на полной скорости. Полученное пюре переносят в перегонную колбу емкостью 2 л. Смеситель промывают водой и промывные жидкости добавляют к содержимому колбы. (Общее количество воды, используемой для смешивания и промывки, составляет 1 л). К смеси добавляют 2 мл серной кислоты, 1 мл пеногасящей эмульсии и несколько пористых гранул. На колбе установлены сепаратор и обратный конденсатор. В сепаратор наливают дистиллированную воду до тех пор, пока уровень воды не достигнет нижнего плеча боковой возвратной трубки, а затем добавляют 7 мл циклогексана. Его перегоняют около двух часов. Затем содержимое сепаратора собирают в градуированную колбу емкостью 10 мл, сепаратор промывают примерно 1,5 мл циклогексана и промывные жидкости добавляют к содержимому колбы, которое затем доводят до объема циклогексаном. Наконец добавляют немного безводного сульфата натрия и смесь встряхивают.

(б) Хроматография

30 граммов силикагеля и 60 мл воды помещают в миксер и перемешивают в течение одной минуты. Затем смесь выливают на 5 хроматографических тарелок и распределяют так, чтобы образовался слой толщиной примерно 0,250 мм. Пластины, покрытые этим слоем, подвергают в течение пятнадцати минут воздействию потока горячего воздуха, а затем помещают в печь, где выдерживают тридцать минут при температуре 110 ºC. После охлаждения каждую пластину разделяют на четыре полосы шириной 4,5 см параллельными линиями, пронизывающими покровный слой до поверхности пластины. 50 мкл анализируемого экстракта наносят рядом капель на одну из полосок примерно в 1,5 см от края чашки. На каждую из трех других полосок таким же образом наносят по 50 л стандартных растворов (а), (б) и (в), что соответствует соответственно 30, 50 и 70 л уровня бифенила.

Если анализы проводятся последовательно, стандартные растворы не нужно наносить на каждый планшет, а стандартную кривую можно построить на основе среднего значения, полученного как минимум на пяти планшетах с одинаковыми количествами стандартов.

(c) Построение хроматограмм и элюирование

Хроматограммы проявляют гексаном до высоты 17 см в чашках, предварительно застеленных фильтровальной бумагой. Пластины сушат на воздухе. Области локализации бифенила выделены в У.Ф. светом (254 нм) и размечены прямоугольниками равных площадей.

Отмеченные таким образом участки сразу же зачищают шпателем на всю толщину несущего слоя. Из него дифенил экстрагируют 10 мл этанола в течение десяти минут, несколько раз встряхивая. Смесь переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение пяти минут при 2500 об/мин.

Контрольная проба одинакового размера отбирается тем же методом. Если анализы проводятся последовательно, эта контрольная область берется с неиспользованной полоски планшета; если анализы проводятся индивидуально, то берут их с одной из полосок, содержащих стандартный раствор, расположенной ниже области, содержащей бифенил.

(d) Спектрофотометрическое определение

Надосадочную жидкость декантируют в ячейки спектрофотометра, определяют экстинкцию при 248 нм и сравнивают с контрольным экстрактом из хроматографической зоны, свободной от бифенила.

6. Подсчет результатов

Рисуется стандартная кривая, отображающая значения бифенила 30, 50 и 70 мкг в зависимости от соответствующих экстинкций, определенных на спектрофотометре. Это дает прямую линию, проходящую через начало координат. Этот график позволяет определить содержание бифенила в образцах непосредственно в частях на миллион по значению экстинкции их экстрактов.

ПРИЛОЖЕНИЕ IV КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ОСТАТКОВ ОРТОФЕНИЛФЕНОЛА И ОРТОФЕНИЛФЕНАТА НАТРИЯ В ЦИТРУСОВЫХ ФРУКТАХ

1. Цель и сфера применения

Описанный ниже метод позволяет провести количественный анализ остатков ортофенилфенола (ОПФ) и ортофенилфената натрия в цитрусовых (цельных фруктах). Этот метод дает результаты, которые при содержании ОРФ или ортофенилфената натрия порядка 12 частей на миллион являются низкими, в среднем на величину от 10% до 20%.

2. Принцип

После перегонки в кислой среде и экстракции диизопентиловым эфиром экстракт очищают и обрабатывают раствором 4-амино-2,3-диметил-1-фенил-3-пиразолин-5-она (= 4-аминоантипирин). Появляется красный цвет, интенсивность которого измеряется спектрофотометрически при длине волны 510 нм.

3. Реагенты

70 % ортофосфорная кислота

Противовспенивающая эмульсия на основе силикона

Диизопентиловый эфир А.Р.

очищенный циклогексан; трижды встряхнуть с 4 % раствором гидроксида натрия, трижды промыть дистиллированной водой

4 % раствор гидроксида натрия

Буферный раствор с pH 10,4: в 2-литровую градуированную колбу поместите 6,64 грамма борной кислоты, 8,00 грамма хлорида калия и 93,1 мл раствора N гидроксида натрия: перемешайте и доведите до калибровочной отметки дистиллированной водой

Реагент I: растворить 1,0 грамма 4-амино-2,3-диметил-1-фенил-3-пиразолин-5-она (= 4-аминотипирина) в 100 мл дистиллированной воды

Реагент II: 2,0 г ферроцианида калия растворить в 100 мл дистиллированной воды. Реагенты I и II необходимо хранить в колбах из коричневого стекла, они стабильны только примерно четырнадцать дней

силикагель

Стандартный раствор: растворите 10 миллиграммов чистого ОПФ в 1 мл 0,1 N NaOH; разбавить до 100 мл 0,2 м раствором бората натрия (1 мл = 100 мкг). Стандартный раствор разбавляют буферным раствором в соотношении 1:10.

4. Оборудование

измельчитель или дробилка

микшер

Перегонная колба объемом 1 литр с модифицированным сепаратором типа Клевенджера (1) и обратным конденсатором

инфракрасная ванна

Делительная воронка 200 мл

Градуированные цилиндры по 25 и 100 мл

Градуированные колбы по 25 и 100 мл

Пипетки от 1 до 10 мл

Градуированные пипетки 0,5 мл

спектрофотометр с кюветами 5 см

5. Метод

Все фрукты в образце для проверки разрезаны пополам. Половину каждого фрукта оставляют для качественного анализа на наличие остатков бифенила, ОПФ или ортофенилфената натрия. Остальные половинки соединяют все вместе и измельчают в мельнице или измельчают до получения однородной смеси. Из него отбирают по меньшей мере две подпробы по 250 граммов для анализа следующим образом.

Каждый подобразец помещают в смеситель с 500 мл воды и перемешивают до получения очень мелкой однородной смеси, в которой маслянистые клетки больше не заметны. Отбирают пробу от 150 до 300 граммов пюре в зависимости от предполагаемого содержания ОПФ и помещают в перегонную колбу емкостью 1 литр с количеством воды, достаточным для разбавления смеси в колбе до 500 граммов. После добавления 10 мл 70 % ортофосфорной кислоты, нескольких пористых гранул и 0,5 мл пеногасящей эмульсии на колбу надевают сепаратор и обратный холодильник. В сепаратор помещают 10 мл диизопентилового эфира и осторожно нагревают колбу в инфракрасной бане, не допуская кипения и пенообразования пюре. После перегонки в течение примерно шести часов содержимое сепаратора сливают в делительную воронку емкостью 200 мл, сепаратор и конденсатор промывают 60 мл циклогексана, а затем 60 мл воды. Промывные воды добавляются к содержимому делительной воронки. Смесь энергично встряхивают и после разделения фаз водную фазу отбрасывают.

Для экстракции ОПФ органическую фазу пять раз энергично встряхивают, каждый раз по три минуты, с 10 мл 4 % гидроксида натрия. Щелочные растворы объединяют, нейтрализуют до рII 9-10 ортофосфорной кислотой в присутствии фенолфталеиновой бумаги и доводят до 100 мл дистиллированной водой. Добавляют щепотку силикагеля, чтобы осветлить раствор, который будет иметь слегка мутный вид. Затем раствор встряхивают и фильтруют через сухой мелкозернистый фильтр. Поскольку окраска достигается с максимальной точностью и точностью при использовании количеств ОРР от 10 до 70 мкг, аликвотную пробу раствора объемом от 0,5 до 10 мл отбирают пипеткой, принимая во внимание количества ОРР, которые могут можно ожидать, что они будут найдены. Пробу помещают в градуированную колбу емкостью 25 мл; к этому добавляют 0,5 мл реактива I, 10 мл буферного раствора и затем 0,5 мл реактива II. Смесь доводят до калибровочной отметки буферным раствором и энергично встряхивают.

Через пять минут с помощью спектрофотометра измеряют затухание красной окраски при 510 нм по сравнению с контролем, не содержащим экстракта. Цвет не теряет интенсивности в течение тридцати минут. Оценка производится на основе стандартной кривой, построенной в тех же условиях с использованием стандартного раствора ОРР.

6. Наблюдения

Для каждого анализа рекомендуется проводить спектрофотометрическое определение в двух экземплярах с разными объемами нейтрализованного щелочного экстракта.

Необработанные цитрусовые с помощью этого метода дают «холостые» показания до 0,5 частей на миллион для апельсинов и 0,8 частей на миллион для лимонов. (1) См. рисунок на стр. 180.

КЛЕВЕНДЖЕР

(Приложение III, глава 4;

Приложение IV, глава 4)

>ФАЙЛ PIC="T0001699">